Islet-1在C 3 H 10 T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化过程中的作用研究

发布时间：2021-05-08 00:11

　　目的利用慢病毒载体通过正反两方面调控Islet-1（Insulin gene enhancer binding protein-1,胰岛素增强结合因子）蛋白的表达来探讨Islet-1因子在C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用;明确这种作用是否为心肌特异性。材料与方法1. Islet-1慢病毒表达载体的构建:利用PCR方法钓取Islet-1基因,将其与pLenO-WPI载体分别进行双酶切。纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,对长出的克隆先进行PCR鉴定,其上下游引物分别设计在载体和目的基因上,PCR鉴定为阳性的克隆,证明Islet-1基因已经定向连入目的载体。再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体。将构建好的融合蛋白表达载体进行超纯去内毒素抽提,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。2. Islet-1慢病毒干扰载体的构建:针对小鼠Islet-1基因设计3个RNA干扰（RNAi）靶序列,合成相应的短发卡RNA（shRNA）寡核苷酸序列（oligo）:Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVT... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 小鼠Islet-1 慢病毒表达载体与干扰载体的构建
    前言
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    参考文献
第二部分 Islet-1 因子对干细胞向心肌样细胞分化的特异性作用
    前言
    1 材料与方法
    2 实验结果
    3 讨论
    参考文献
全文总结
文献综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文及参加的学术交流


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3174297