片形吸虫“中间型”组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定

发布时间：2021-05-15 18:44

　　组织蛋白酶L2（CathepsinL2,CatL2）存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"（"intermediate form"of Fasciola,Fsp）CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形吸虫组织蛋白酶L2基因设计特异性引物,应用RT-PCR获得虫体的FspCatL2基因,经TA克隆后,进行测序及生物学分析;进一步构建原核表达重组质粒PET-28a（+）-FspCatL2,在大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行诱导表达,将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明扩增得到的FspCatL2基因的大小为933 bp,编码311个氨基酸,生物信息学显示FspCatL2有较多的α-螺旋,具有较好的抗原表位,推测该蛋白应有较好的抗原性。SDS-PAGE结果显示在35 kDa处有目的条带,Western Blot分析发现重组FspCatL2与片形吸虫"中间型"阳性血清发生反应,而与阴性血清不发生反应。实验成功克隆表达了片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2,为进一步研究其功能奠定了基础。 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学学报. 2019,31(06)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫体与血清
    1.2 主要材料及试剂
    1.3 虫体的分子鉴定
    1.4 引物的设计及目的基因的扩增
    1.5 虫体总RNA的提取及cDNA的合成
    1.6 目的基因的克隆及序列分析
    1.7 生物信息学分析
    1.8 目的蛋白最佳诱导条件的优化、SDS-PAGE及Western blot分析
2 结果
    2.1 片形吸虫“中间型”的分子鉴定
    2.2 片形吸虫“中间型”FspCatL2基因的扩增
    2.3 生物信息学分析
    2.4 PET-28a-FspCatL2重组质粒的鉴定
    2.5 目的蛋白的最适诱导条件的优化、SDS-PAGE及Western blot分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]鼻状杯环线虫形态学与分子生物学鉴定[J]. 高远,仇建华,常巧呈,高俊峰,王春仁.  黑龙江八一农垦大学学报. 2017(04)
[2]桦褐孔菌酸性蛋白酶基因的克隆及其生物信息分析[J]. 李健,张宇婷,安丹丹,陈艳秋.  延边大学农学学报. 2016(04)
[3]肝片吸虫组织蛋白酶L真核表达载体构建及重组蛋白活性分析[J]. 闻晓波,冉旭华,王春仁,宋佰芬,魏晓曼,李晓娟,王密,苗艳.  中国人兽共患病学报. 2013(01)



本文编号：3188152