基于诺如病毒P粒子载体的EV71/CVA16表位展示、免疫原性研究及中和表位鉴定

发布时间：2021-05-23 10:54

　　手足口病（Hand,foot and mouth disease, HFMD）是一种婴幼儿易感的病毒性传染病,世界大部分国家和地区均有流行。近些年,出现在亚太地区的手足口病的大规模爆发引起高的发病率与死亡率,手足口病已成为亚太地区严重的公共健康问题之一。引起HFMD的病原体为肠道病毒,最常见的是肠道病毒71型（Enterovirus 71, EV71）和柯萨奇病毒A16型（Coxsackievirus A16, CVA16）,CVA16的临床症状较温和,由该病毒感染引起的病例数量常超过总感染人数的60%以上。EV71则易引起中枢神经系统疾病包括病毒性脑膜炎,脑炎,类似小儿麻痹的瘫痪、肺水肿和心肌炎等并发症,经常导致婴幼儿的死亡。在手足口病的治疗方面,目前临床上使用广谱的抗病毒药物,但效果不佳。在预防方面,我国大陆已有3家公司的EV71灭活疫苗已进入Ⅲ临床,均呈现良好的体内保护效果,但仍未上市使用。然而人们对EV71/CVA16的抗原特性所知尚浅,深入的研究势在必行。揭示EV71/CVA16的抗原性和表位特征,尤其是中和表位的鉴定对疫苗设计至关重要。目前有多篇文献报道了EV71的B细胞表... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1. 手足口病简介
        1.1 手足口病的临床症状
        1.2 EV71和CVA16的病原学
        1.3 手足口病的临床和分子流行病学
        1.4 手足口病的治疗与预防
    2. 特异性抗原表位的筛选
        2.1 抗原表位的筛选方式
        2.2 抗原表位的呈递载体
    3. 本文立题依据与实验设计思路
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系及病毒
        2.1.2 短肽及灭活、VLPs蛋白
        2.1.3 质粒、菌种和细胞
        2.1.4 实验动物
        2.1.5 主要仪器
        2.1.6 常用试剂
        2.1.7 主要溶剂配制
        2.1.8 相关引物的设计和合成
    2.2 实验方法
        2.2.1 表位的选择
        2.2.2 pET28a-PP-EV71和pET28a-PP-CVA16嵌合质粒的构建
        2.2.3 pET28a-PP-EV71和pET28a-PP-CVA16嵌合蛋白表达及纯化
        2.2.4 目的蛋白的鉴定
        2.2.5 免疫实验
        2.2.6 免疫评价
        2.2.7 蛋白结构预测
        2.2.8 统计学分析
第三章 实验结果与分析
    3.1 嵌合质粒pET28a(+)-PP-epitope的构建
    3.2 PP-epitope嵌合蛋白的诱导表达及纯化
    3.3 PP-epitope嵌合蛋白的鉴定
        3.3.1 SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白表达
        3.3.2 嵌合蛋白的定量分析
    3.4 免疫策略
    3.5 血清检测与抗体评估
        3.5.1 免疫血清中结合抗体的检测
        3.5.2 免疫血清中特异性中和抗体的检测
        3.5.3 免疫血清的体内保护力评价
    3.6 PP-71-6嵌合蛋白结构的表征
        3.6.1 电镜分析
        3.6.2 3D结构模拟
    3.7 中和表位71-6的鉴定与特征
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]新型人类肠道病毒的研究进展[J]. 陈鹏,陶泽新,王海岩,宋艳艳,王显军,徐爱强.  病毒学报. 2013(02)
[2]表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白的重组鼠白血病病毒的特性[J]. 刘华雷,Rong Li-Jun,周斌,魏建超,郑其升,陈溥言.  生物工程学报. 2005(01)



本文编号：3202392