OCILRP2调节TLR4信号通路对巨噬细胞功能的影响

发布时间：2021-05-28 08:07

　　背景破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2（Osteoclast inhibitory lectin related protein2,OCILRP2）也被称为clr-g,是一种Ⅱ型跨膜蛋白,属于C型凝集素相关（clr）蛋白家族。OCILRP2基因最初被发现在骨质形成中发挥作用,可表达于B细胞,树突状细胞（DC）和活化的T细胞。OCILRP2与配体NKRP1f结合,在T细胞中作为一种共刺激分子促进细胞因子IL-2的分泌和T细胞的增殖。沉默OCILRP2的T淋巴细胞,增殖能力和分泌细胞因子IL-2的水平显著降低。体外阻断OCILRP2受体信号可抑制LPS诱导的树突状细胞的成熟与活化。巨噬细胞是炎症反应中的效应细胞,依靠其强大的免疫识别和清除异物的能力,在维持机体内环境稳定等方面,发挥着强大功能。Toll样受体（TLR）是巨噬细胞表面的一类重要的模式识别受体,其主要成员Toll样受体4（Toll-LikeReceptor4,TLR4）主要分布于巨噬细胞、树突状细胞以及T淋巴细胞等,可以识别革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖（LPS）,并被其激活,从而启动TLR4信号通路,导致促炎细胞因子和干扰素的产生,从而... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
引言
1 试剂与设备
    1.1 细胞系与主要试剂
    1.2 仪器与设备
    1.3 主要溶剂的配制
2 方法
    2.1 细胞培养和转染
        2.1.1 细胞培养
        2.1.2 细胞复苏
        2.1.3 细胞冻存
        2.1.4 细胞传代
        2.1.5 细胞计数
        2.1.6 细胞转染
    2.2 敲低OCILRP2稳定株的筛选
        2.2.1 构建OCILRP2shRNA慢病毒载体
        2.2.2 慢病毒颗粒的制备
        2.2.3 筛选嘌呤霉素的最佳浓度
        2.2.4 慢病毒颗粒感染与细胞筛选
    2.3 敲低OCILRP2的验证
        2.3.1 Westernblot检测细胞中OCILRP2的蛋白表达
        2.3.2 RT-qPCR检测细胞中OCILRP2的表达
    2.4 细胞功能检测
        2.4.1 细胞粘附能力的检测
        2.4.2 细胞迁移能力的检测
        2.4.3 细胞内吞能力的检测
        2.4.4 细胞因子的检测
        2.4.5 细胞NO分泌的检测
    2.5 TLR4通路中相关蛋白的检测
        2.5.1 信号通路中蛋白的检测
        2.5.2 NF-?B的活性检测
        2.5.3 NF-?B核转位的检测
    2.6 统计学分析
3 结果
    3.1 沉默OCILRP2基因的验证
    3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的粘附能力
    3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力
        3.3.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的划痕愈合能力
        3.3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力
        3.3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的趋化能力
    3.4 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的内吞功能
        3.4.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的吞饮能力
        3.4.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬能力
    3.5 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子的释放
    3.6 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞分泌NO及表达iNOS的能力
    3.7 沉默OCILRP2不影响C-Raf、AKT、p44/42、p38的磷酸化水平
    3.8 沉默OCILRP2下调TBK1、IRF3、TAK1、IκB-α、p65的磷酸化水平
    3.9 沉默OCILRP2抑制巨噬细胞NF-?B的活化
    3.10 沉默OCILRP2抑制巨噬细胞NF-?B核转位
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间参加的学术会议及研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Hwangryunhaedoktang exerts anti-inflammation on LPS-induced NO production by suppressing MAPK and NF-κB activation in RAW264.7 macrophages[J]. Byung Hyuk Han,Yun Jung Lee,Jung Joo Yoon,Eun Sik Choi,Seung Namgung,Xian Jun Jin,Da Hye Jeong,Dae Gill Kang,Ho Sub Lee.  Journal of Integrative Medicine. 2017(04)
[2]TLR4信号通路与抑郁症的研究进展[J]. 汪露,陈晋东.  中南大学学报(医学版). 2017(06)



本文编号：3207894