体外诱导人羊膜间充质干细胞向胆管上皮细胞分化的实验研究
发布时间：2021-06-08 05:24
目的:探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）的间充质干细胞特性,以及在体外经诱导后能否向胆管上皮细胞分化,为胆管生物工程奠定基础。方法:1)取足月剖宫产胎盘羊膜组织,用酶消化法分离出人羊膜间充质干细胞,取第3代细胞进行流式细胞术检测鉴定h AMSCs表型特征,免疫荧光染色检测hAMSCs波形蛋白和CK-19的表达,在体外经诱导向成骨、成脂肪细胞分化。2)将h AMSCs体外定向分化为肝干细胞:将第3代h AMSCs接种于6孔板加入含肝细胞生长因子的LG-DMEM培养基诱导分化,观察细胞生长分化形态,细胞出现圆形、卵圆形或多角形改变后,收集细胞培养液进行生化检测碱性磷酸酶、甲胎蛋白及白蛋白含量。3)诱导肝干细胞向胆管上皮细胞分化:向上述诱导后的细胞6孔板内,加入含干细胞因子、肝细胞生长因子、表皮生长因子的LG-DMEM培养液,观察细胞生长及分化情况,出现胆管内皮细胞典型形态时,通过免疫荧光染色检测细胞角蛋白CK19的表达,以及实时定量聚合酶链反应（Real-time quantitative polymeras...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hAMSCs形态学观察（40×）
图 2 hAMSCs 表面标记的表达A：表面标记 CD73 B：表面标记 CD44 C：表面标记 CD90D：表面标记 CD105 E：CD34-CD11b-CD19-CD45-HLA-DR2.2.2 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 的表达免疫荧光法检测第 3 代 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 表达的结果：CK19 呈阴性表达；波形蛋白呈阳性表达，阳性表达率 98.66%±0.21% 。（见图 3）2.2.3 hAMSCs 多向分化的特性取第 3 代 hAMSCs 在体外经诱导分化为成脂肪细胞、成骨分化，诱导培养 21 天后，分别通过油红 O、茜素红染液染色观察，成脂肪细胞诱导的细胞油红 O 染色后可见脂滴。成骨诱导的细胞茜素红染液染色后可见矿化结节，呈橘红色。（见图 4）
图 3 hAMSCs 的 CK19 及波形蛋白的表达（100×）A：hAMSCs 不表达 CK19 B：hAMSCs 表达波形蛋白（绿色） C:DAPI（蓝色） D:B、C 合并图 4 hAMSCs 向成脂肪细胞、成骨分化 21 天后染色结果（100×）A：成脂肪细胞诱导后油红 O 染色 B：成骨诱导后茜素红染液染色A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]人羊膜在骨科领域的研究进展[J]. 汤开,吴佳怿,熊泽康,郭晓东. 国际骨科学杂志. 2017(06)
[2]良性胆管狭窄临床诊疗现状[J]. 张博皓,张小文. 河南大学学报(医学版). 2017(03)
[3]Pedicled omental patch as a bridging procedure for iatrogenic bile duct injury[J]. Jun Jie Ng,Alfred Wei Chieh Kow. World Journal of Gastroenterology. 2017(36)
[4]人脱细胞羊膜在构建组织工程支架中的应用及研究方向[J]. 杨继滨,熊华章,李豫皖,刘毅. 中国组织工程研究. 2017(25)
[5]脐带间充质干细胞培养的研究进展[J]. 冯可欣,詹昱,曲佳,巫进明,陈玲珍,杨郁青,谭明珠,陈燕梅,谭雪芳,罗英. 中国现代药物应用. 2017(13)
[6]人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性[J]. 刘超,徐志国,王绍红,程红玲,杨旭巍,贡波,刘洋,徐春艳. 中国组织工程研究. 2017(13)
[7]TGF-β1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究[J]. 邹刚,李豫皖,金瑛,朱喜忠,杨继滨,王胜民,尤奇,熊华章,刘毅. 中国修复重建外科杂志. 2017(05)
[8]共培养的角膜上皮细胞诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞[J]. 刘小勇,陈剑,周清,徐纬,叶龙燕,周健庭,金玲. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(04)
[9]人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化[J]. 李萍,王久存,陆瑶,许惠利. 中国组织工程研究. 2017(09)
[10]人羊膜细胞外基质修复尿道下裂的实验研究[J]. 舒林飞,田源,王雷,肖跃海,孙超,唐开发,孙发. 贵州医科大学学报. 2017(03)
硕士论文
[1]体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的实验研究[D]. 姚敏.暨南大学 2013
[2]体外诱导人羊膜细胞向神经细胞分化[D]. 刘娟.遵义医学院 2012
本文编号：3217788
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hAMSCs形态学观察（40×）
图 2 hAMSCs 表面标记的表达A：表面标记 CD73 B：表面标记 CD44 C：表面标记 CD90D：表面标记 CD105 E：CD34-CD11b-CD19-CD45-HLA-DR2.2.2 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 的表达免疫荧光法检测第 3 代 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 表达的结果：CK19 呈阴性表达；波形蛋白呈阳性表达，阳性表达率 98.66%±0.21% 。（见图 3）2.2.3 hAMSCs 多向分化的特性取第 3 代 hAMSCs 在体外经诱导分化为成脂肪细胞、成骨分化，诱导培养 21 天后，分别通过油红 O、茜素红染液染色观察，成脂肪细胞诱导的细胞油红 O 染色后可见脂滴。成骨诱导的细胞茜素红染液染色后可见矿化结节，呈橘红色。（见图 4）
图 3 hAMSCs 的 CK19 及波形蛋白的表达（100×）A：hAMSCs 不表达 CK19 B：hAMSCs 表达波形蛋白（绿色） C:DAPI（蓝色） D:B、C 合并图 4 hAMSCs 向成脂肪细胞、成骨分化 21 天后染色结果（100×）A：成脂肪细胞诱导后油红 O 染色 B：成骨诱导后茜素红染液染色A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]人羊膜在骨科领域的研究进展[J]. 汤开,吴佳怿,熊泽康,郭晓东. 国际骨科学杂志. 2017(06)
[2]良性胆管狭窄临床诊疗现状[J]. 张博皓,张小文. 河南大学学报(医学版). 2017(03)
[3]Pedicled omental patch as a bridging procedure for iatrogenic bile duct injury[J]. Jun Jie Ng,Alfred Wei Chieh Kow. World Journal of Gastroenterology. 2017(36)
[4]人脱细胞羊膜在构建组织工程支架中的应用及研究方向[J]. 杨继滨,熊华章,李豫皖,刘毅. 中国组织工程研究. 2017(25)
[5]脐带间充质干细胞培养的研究进展[J]. 冯可欣,詹昱,曲佳,巫进明,陈玲珍,杨郁青,谭明珠,陈燕梅,谭雪芳,罗英. 中国现代药物应用. 2017(13)
[6]人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性[J]. 刘超,徐志国,王绍红,程红玲,杨旭巍,贡波,刘洋,徐春艳. 中国组织工程研究. 2017(13)
[7]TGF-β1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究[J]. 邹刚,李豫皖,金瑛,朱喜忠,杨继滨,王胜民,尤奇,熊华章,刘毅. 中国修复重建外科杂志. 2017(05)
[8]共培养的角膜上皮细胞诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞[J]. 刘小勇,陈剑,周清,徐纬,叶龙燕,周健庭,金玲. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(04)
[9]人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化[J]. 李萍,王久存,陆瑶,许惠利. 中国组织工程研究. 2017(09)
[10]人羊膜细胞外基质修复尿道下裂的实验研究[J]. 舒林飞,田源,王雷,肖跃海,孙超,唐开发,孙发. 贵州医科大学学报. 2017(03)
硕士论文
[1]体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的实验研究[D]. 姚敏.暨南大学 2013
[2]体外诱导人羊膜细胞向神经细胞分化[D]. 刘娟.遵义医学院 2012
本文编号：3217788
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