Ficoll分离法富集脐带血自然杀伤细胞的实验条件分析

发布时间：2021-06-14 22:31

　　目的探讨影响Ficoll分离法富集脐带血（UCB）自然杀伤细胞（NK）的实验条件。方法在不同保存温度、复温时间、Ficoll密度和抗凝剂比例条件下,Ficoll法分离临床UCB,通过流式检测NK存活率、富集前后的回收率以及粒细胞清除率,评判富集效果。结果 UCB在4、25、37℃下可保存至7h,随后UCB中NK存活率和富集回收率、粒细胞清除率随时间延长明显下降。对长时间保存的4℃脐血,可在不影响NK存活率情况下,通过复温37℃1h或适度增加Ficoll密度提升回收率。此外,血袋规格应与采集血量相匹配,否则较少血量会导致预留抗凝剂在UCB中的浓度变大,也会降低NK富集回收率。结论在保持UCB与抗凝剂正常比例情况下,临床UCB 37℃保存7h内进行Ficoll分离法富集NK可达到较好富集效果。 

【文章来源】：成都医学院学报. 2020,15(01)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

复温对UCB NK富集的影响

检测不同时刻、不同保存温度下NK存活率，结果显示：NK活细胞数量在4℃条件下，可持续保存26h无明显变化；25、37℃保存至7h无明显变化，但随后NK活细胞数随时间延长而减少，26h时，25、37℃的NK存活率分别减少至3h的（59.0±4.3）%和（42.5±3.7）%，说明对NK活性无影响的较好长时间保存温度是4℃。检测不同时刻、不同保存温度下，Ficoll法分离的单个核细胞悬液中NK回收率，结果显示：4℃保存条件下，3、7h的NK回收率为100%，但19、26h的回收率呈下降趋势，26h的回收率下降至（72.2±3.3）%，说明4℃的长时间保存温度对获得理想NK回收率不利。25℃和37℃保存条件下，3、7、19、26h的NK回收率无明显变化，接近100%，说明25℃和37℃温度保存对NK富集无影响。但UCB超过7h保存，无论哪种保存温度，其Ficoll分离法富集后的细胞悬液中粒细胞残留比例随着保存时间延长而逐渐增加。因此，综合NK存活率、回收率，UCB只要在7h以内Ficoll分离，这3种保存温度差异无统计学意义（P>0.05）（图2）。2.3 复温时间的优化

为进一步探究4℃冷藏的UCB复温至37℃多长时间更有利于NK富集，分别检测了37℃复温0、1、2、3、4hNK存活率以及常规Ficoll法富集NK回收率和粒细胞残留比例情况，结果显示：37℃复温0～4h各组的UCB NK活细胞数差异无统计学意义（P>0.05），说明37℃复温4h操作对UCB中NK活性不影响。复温1h可将NK细胞回收率由0h的（65.0±3.5）%提高到（96.0±4.1）%，差异有统计学意义（P<0.001）。但2、3、4h回收率与1h回收率差异无统计学意义（P>0.05），说明37℃复温1h已达回收率最高限。各时刻富集的细胞悬液中粒细胞残留比例随着复温时间延长而增加，4h可达38.15%。结果表明：对4℃保存的UCB放置37℃的最佳复温时长为1h（图3）。2.4 Ficoll密度对4℃保存的UCB NK富集的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]流式细胞术检测细胞存活率的方法学建立[J]. 刘阳,赖翼,李敏惠,杨淑霞,郑静,阳泰,李丽梅,邓勇,张强,任荣梅,李钱梅,张帅,邹强,李华.  国际检验医学杂志. 2011(15)



本文编号：3230344