人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定

发布时间：2021-06-24 08:51

　　目的构建人可溶性生长刺激表达基因2（sST2）蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白。方法根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his（-）重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1 000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用BamHⅠ和HindⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量（Mr）约为65 000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位。结论通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组... 

【文章来源】：临床检验杂志. 2020,38(02)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

人sST2基因PCR扩增产物凝胶电泳分析

人sST2-PGH-T重组载体转化大肠埃希菌DH5α感受态后,经菌落PCR鉴定,琼脂糖凝胶电泳出现阳性条带。同源比对分析结果显示人sST2成功插入T载体(只出现1个碱基突变)(见图2)。2.3 人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体鉴定

用BamHⅠ和HindⅢ双酶切人sST2-PGH-T重组载体和pcDNA3.1-his(-)质粒后琼脂糖凝胶电泳显示产物电泳位置与预期一致(见图3),目的片段胶回收后T4酶连接获得人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体并再次BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。琼脂糖凝胶电泳结果显示产物电泳位置与预期一致(见图4)。图4 人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组表达载体双酶切产物鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3246783