过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

发布时间：2021-07-09 04:43

　　目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:（1）用重组腺病毒Ad-BMP9（BMP9）诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR（qPCR）检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。（2）miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测miR-155的表达,ALP活性和染色检测早期成骨能力。（3）miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。（4）miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN的表达。（5）miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。（6）qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。（7）应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果:在BMP9诱导C3H10... 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2017,37(05)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞和重组腺病毒来源
        1.1.2 试剂来源
        1.1.3 转染所用寡核苷酸序列
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 细胞转染
        1.2.3 ALP染色及活性测定
        1.2.4 茜素红S染色
        1.2.5 PCR
        1.2.6 Western blot
        1.2.7 荧光素酶报告基因实验
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化过程中miR-155的表达变化
    2.2 过表达miR-155减弱BMP9诱导的C3H10T1/2细胞早期成骨分化
    2.3 过表达miR-155减弱BMP9诱导的C3H10T1/2细胞晚期成骨分化
    2.4 过表达miR-155降低BMP9诱导的成骨相关因子的表达
    2.5 过表达miR-155抑制BMP信号通路
    2.6 过表达miR-155抑制HIF1α和VEGF的表达
    2.7 miR-155直接靶向HIF1α
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNAs in Common Human Diseases[J]. Kris V.Kowdley.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2012(05)



本文编号：3273051