骨髓间充质干细胞通过ERK1/2通路分化为肠上皮样细胞的研究
发布时间：2021-07-12 03:17
[目的]旨在讨论肠上皮细胞（Intestinal Epithelial Cells-6,IEC-6）在诱导骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）分化过程中的机制,为骨髓间充质干细胞的分化机制提供参考。[方法]1.用全骨髓贴壁培养法从大鼠股骨和胫骨中提取骨髓间充质干细胞并培养,从细胞形态、细胞表面抗原、细胞成脂诱导方面对其进行鉴定。2.实验分组为实验共培养组BMSCs+IEC-6和空白对照组BMSCs+BMSCs。将IEC-6和BMSCs分别置于Transwell上、下室中共同培养3、7、10天,诱导BMSCs的分化,后用免疫荧光技术检测CK、Villin的表达情况。3.实验分组为实验共培养组BMSCs+IEC-6、实验抑制组BMSCs+IEC-6+U0126 和空白对照组 BMSCs+BMSCs。用 Transwell 共同培养 36h和72h,用Western Blot的方法检测ERK1/2通路相关蛋白p-ERK1/2和p-MEK1/2的表达情况。[结果]1.用全骨髓贴壁培养法分离获取的BMSCs,呈长梭形生长,放射状排列...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．３?Ｐ０代干细胞第六天（４０?Ｘ?）?图１．４Ｐ０代干细胞第九天（４０Ｘ?）??
形态更加细长，增值速度明显快于原代，生长４－－５天后细胞融合率达８０％－－９０°／〇，??可以传至第２代。Ｐ２代细胞增殖速度更快，生长更旺盛，排列整齐规则，统一??呈长梭形。如图１．１－１．４：??■?■??图Ｕ?Ｐ０代干细胞第一天（４０Ｘ?）?图１．２?Ｈ）代干细胞第四天（４０Ｘ?）??ｍｍ??图１．３?Ｐ０代干细胞第六天（４０?Ｘ?）?图１．４Ｐ０代干细胞第九天（４０Ｘ?）??图随着培养时间增长，细胞由原来的零散分布变为簇状分布，细胞集落扩大??增多，并开始互相融合，细胞形态也逐渐统一，呈长梭形。??２．２骨髓间充质干细胞活力测定??细胞活力约为９７．３％，细胞活力好，可用于后续实验。??表１．１细胞活力鉴定??上室?下室??左上?右上?左下?右下?左上?右上?左下?右下?百分比??蓝染?１０?１?０?１１０?１?３．５％??拒染?１９?１５?１５?１８?１６?１８?２０?１８?９６．５％??表１．１拒染细胞百分率即为细胞活力，为９８．３２％，可用于后续实验。??２．３骨髓间充质干细胞表面抗原的测定??采用细胞形态均一，生长状态佳的第３代ＢＭＳＣｓ进行检测。细胞经流式细??１４??
圓圓??图１．７诱导组ＢＭＳＣｓ染色前（１００Ｘ）?图１．８诱导组ＢＭＳＣｓ染色后（１００Ｘ）??二遺？＇＇?：絮Ｐ??ＳｉＳｉｌｌ??ＨＨ??图１．９对照组ＢＭＳＣｓ染色前（１００Ｘ）?图１．１０对照组ＢＭＳＣｓ染色后（１００Ｘ）??图１．７－－１．１０：诱导组经油红Ｏ染色后，可见圆形脂滴细胞被染成红色，而空白对照??组染色前后无变化，仍为长梭形，且不能被油红０染色。??３讨论??间充质干细胞（ＭＳＣｓ）是来源于中胚层的多能干细胞，具有干细胞所特有??的自我更新复制、增殖和分化的潜能，能够增殖分化为与其自身性质完全相同的??细胞，同时也可以在特定条件下分化为其他胚层的细胞［１］，如中胚层的骨细胞［２］、??软骨细胞、脂肪细胞【３］，内胚层的肌细胞［３］、肠上皮细胞、肺细胞及为外胚层的??上皮细胞、神经细胞［４］等。ＭＳＣｓ广泛存在于牙髓、脂肪组织、脐带静脉血、皮??肤组织、肌肉等组织和器官［５＿＼但最主要的来源为脂肪组织和骨髓［６］，也是科??研实验中应用最广泛的细胞
【参考文献】：
期刊论文
[1]异体骨髓间充质干细胞治疗乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭的随机对照研究[J]. 林炳亮. 临床肝胆病杂志. 2017(06)
[2]自体骨髓间充质干细胞治疗乙型肝炎失代偿期患者:肝纤维化、肝功能、MELD评分及1年生存率分析[J]. 吴玉卓,杨乐,翟玉峰,张怀宏,霍丽亚. 中国组织工程研究. 2017(13)
[3]BMP-2预诱导骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠再灌注后心肌梗死的实验研究[J]. 苗忠澄,高航. 解放军医学杂志. 2014(08)
[4]Transwell小室共培养条件下缺氧时视网膜色素上皮细胞对内皮细胞增殖的影响[J]. 张晓梅,王彬杰,王巍,王小丹,付小玻,马洪梅,张楠. 哈尔滨医科大学学报. 2011(04)
[5]骨癌痛大鼠鞘内注射U0126的抗痛觉过敏作用[J]. 李彩芳,杨建平,王丽娜,刘磊,胡计嬅,刘思兰. 中国药理学通报. 2011(07)
[6]人骨髓间充质干细胞源性多巴胺神经元的结构和功能特征(英文)[J]. 柴立辉,吴素霞,陈宗德,曹孟德,马远方. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(29)
[7]Differentiation of hepatocytoid cell induced from whole-bone-marrow method isolated rat myeloid mesenchymal stem cells[J]. Wei Li, Su-Nan Liu, Duan-De Luo, Lei Zhao, Ling-Lan Zeng, Shu-Ling Zhang, Shu-Li Li, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, Hubei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(30)
[8]靶向抑制ERK1/2信号传导通路对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981恶性表型的影响[J]. 李印,周清华,孙芝琳,孙泽芳,王艳萍,覃扬,朱文,陈晓禾. 中国肺癌杂志. 2005(06)
[9]Transwell小室筛选高侵袭性C6细胞MMP-2和TIMP-2的表达[J]. 张凌志,邸菁,王运杰,赵昕,张朝东. 肿瘤防治杂志. 2005(10)
[10]肠粘膜上皮细胞的免疫学功能[J]. 石辛甫,高杰英. 国外医学(免疫学分册). 1999(04)
博士论文
[1]自体骨髓间充质干细胞植入联合髓芯减压植骨支撑术治疗早中期股骨头坏死的临床研究[D]. 王上增.郑州大学 2017
硕士论文
[1]骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠道屏障保护作用的研究[D]. 杨波.昆明医科大学 2014
本文编号：3279087
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．３?Ｐ０代干细胞第六天（４０?Ｘ?）?图１．４Ｐ０代干细胞第九天（４０Ｘ?）??
形态更加细长，增值速度明显快于原代，生长４－－５天后细胞融合率达８０％－－９０°／〇，??可以传至第２代。Ｐ２代细胞增殖速度更快，生长更旺盛，排列整齐规则，统一??呈长梭形。如图１．１－１．４：??■?■??图Ｕ?Ｐ０代干细胞第一天（４０Ｘ?）?图１．２?Ｈ）代干细胞第四天（４０Ｘ?）??ｍｍ??图１．３?Ｐ０代干细胞第六天（４０?Ｘ?）?图１．４Ｐ０代干细胞第九天（４０Ｘ?）??图随着培养时间增长，细胞由原来的零散分布变为簇状分布，细胞集落扩大??增多，并开始互相融合，细胞形态也逐渐统一，呈长梭形。??２．２骨髓间充质干细胞活力测定??细胞活力约为９７．３％，细胞活力好，可用于后续实验。??表１．１细胞活力鉴定??上室?下室??左上?右上?左下?右下?左上?右上?左下?右下?百分比??蓝染?１０?１?０?１１０?１?３．５％??拒染?１９?１５?１５?１８?１６?１８?２０?１８?９６．５％??表１．１拒染细胞百分率即为细胞活力，为９８．３２％，可用于后续实验。??２．３骨髓间充质干细胞表面抗原的测定??采用细胞形态均一，生长状态佳的第３代ＢＭＳＣｓ进行检测。细胞经流式细??１４??
圓圓??图１．７诱导组ＢＭＳＣｓ染色前（１００Ｘ）?图１．８诱导组ＢＭＳＣｓ染色后（１００Ｘ）??二遺？＇＇?：絮Ｐ??ＳｉＳｉｌｌ??ＨＨ??图１．９对照组ＢＭＳＣｓ染色前（１００Ｘ）?图１．１０对照组ＢＭＳＣｓ染色后（１００Ｘ）??图１．７－－１．１０：诱导组经油红Ｏ染色后，可见圆形脂滴细胞被染成红色，而空白对照??组染色前后无变化，仍为长梭形，且不能被油红０染色。??３讨论??间充质干细胞（ＭＳＣｓ）是来源于中胚层的多能干细胞，具有干细胞所特有??的自我更新复制、增殖和分化的潜能，能够增殖分化为与其自身性质完全相同的??细胞，同时也可以在特定条件下分化为其他胚层的细胞［１］，如中胚层的骨细胞［２］、??软骨细胞、脂肪细胞【３］，内胚层的肌细胞［３］、肠上皮细胞、肺细胞及为外胚层的??上皮细胞、神经细胞［４］等。ＭＳＣｓ广泛存在于牙髓、脂肪组织、脐带静脉血、皮??肤组织、肌肉等组织和器官［５＿＼但最主要的来源为脂肪组织和骨髓［６］，也是科??研实验中应用最广泛的细胞
【参考文献】：
期刊论文
[1]异体骨髓间充质干细胞治疗乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭的随机对照研究[J]. 林炳亮. 临床肝胆病杂志. 2017(06)
[2]自体骨髓间充质干细胞治疗乙型肝炎失代偿期患者:肝纤维化、肝功能、MELD评分及1年生存率分析[J]. 吴玉卓,杨乐,翟玉峰,张怀宏,霍丽亚. 中国组织工程研究. 2017(13)
[3]BMP-2预诱导骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠再灌注后心肌梗死的实验研究[J]. 苗忠澄,高航. 解放军医学杂志. 2014(08)
[4]Transwell小室共培养条件下缺氧时视网膜色素上皮细胞对内皮细胞增殖的影响[J]. 张晓梅,王彬杰,王巍,王小丹,付小玻,马洪梅,张楠. 哈尔滨医科大学学报. 2011(04)
[5]骨癌痛大鼠鞘内注射U0126的抗痛觉过敏作用[J]. 李彩芳,杨建平,王丽娜,刘磊,胡计嬅,刘思兰. 中国药理学通报. 2011(07)
[6]人骨髓间充质干细胞源性多巴胺神经元的结构和功能特征(英文)[J]. 柴立辉,吴素霞,陈宗德,曹孟德,马远方. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(29)
[7]Differentiation of hepatocytoid cell induced from whole-bone-marrow method isolated rat myeloid mesenchymal stem cells[J]. Wei Li, Su-Nan Liu, Duan-De Luo, Lei Zhao, Ling-Lan Zeng, Shu-Ling Zhang, Shu-Li Li, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, Hubei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(30)
[8]靶向抑制ERK1/2信号传导通路对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981恶性表型的影响[J]. 李印,周清华,孙芝琳,孙泽芳,王艳萍,覃扬,朱文,陈晓禾. 中国肺癌杂志. 2005(06)
[9]Transwell小室筛选高侵袭性C6细胞MMP-2和TIMP-2的表达[J]. 张凌志,邸菁,王运杰,赵昕,张朝东. 肿瘤防治杂志. 2005(10)
[10]肠粘膜上皮细胞的免疫学功能[J]. 石辛甫,高杰英. 国外医学(免疫学分册). 1999(04)
博士论文
[1]自体骨髓间充质干细胞植入联合髓芯减压植骨支撑术治疗早中期股骨头坏死的临床研究[D]. 王上增.郑州大学 2017
硕士论文
[1]骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠道屏障保护作用的研究[D]. 杨波.昆明医科大学 2014
本文编号：3279087
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