短期限食和模拟限食药物通过AMPK/mTOR信号通路延缓老年肾脏的细胞衰老和上皮细胞转分化

发布时间：2021-07-23 05:41

　　目的：上皮细胞的衰老和转分化都可作为肾功能减退的独立危险因素。已有一些证据表明短期限食（CR）和模拟限食（CRM）药物可延缓细胞衰老和上皮细胞转分化（EMT），但是关于他们对衰老肾脏细胞衰老和EMT的研究却极少。本研究集中阐述短期限食和模拟限食药物对衰老肾脏细胞衰老和EMT的作用及机制。方法：实验用雄性SD大鼠分为4组。YAL：3月龄，自由饮食；OAL：25月龄，自由饮食；OCR：25月龄，饮食热量为OAL的60%；OMET：25月龄，自由饮食，同时给予二甲双胍300mg/kg/d。8周后，大鼠肾脏用于进一步研究。从正常肾组织分离的人原代近端肾小管细胞（PTC）被用来进行后续机制的研究。用高糖（HG）诱导细胞衰老和EMT的模型，并用二甲双胍或白藜芦醇和HG共刺激PTC观察二者对衰老和EMT的作用，接着用SiRNA技术沉默AMPK进一步检测AMPK-mTOR信号通路在此过程中的作用。结果：短期限食和二甲双胍能显著下调老年大鼠尿蛋白及血清甘油三酯，激活AMPK-mTOR信号通路，并肾脏延缓衰老及EMT。高糖可诱导PTC衰老和EMT，伴随有AMPK-mTOR信号通路的下调，且白藜芦醇和二甲双... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

A：WesternBlot：YAL、OAL、OCR、OMET四组p16、p21及β-actin的表达变化

图 4.4：A：HG 刺激 PTC 0-48h 细胞免疫荧光染色结果（×200）：红色代表 E-cadherin，绿色代表 α-SMA。B，D，G：Western Blot：HG 刺激 0-48h Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21，AMPK，P-AMPK，mTOR，P-mTOR 及 β-actin 的表达变化。C，G，H : 用ImageJ 分析各组 Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21，AMPK，P-AMPK，mTOR，P-mTOR 及 β-actin 的灰度值，每组实验重复三次，各组 Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21 的灰度值分别与相应的 β-actin 的比值进行统计学分析，*表示 p<0.05，即各组与 NG 相比有统计学意义。F：SAFH 染色（×600）：HG 刺激 PTCs 0-48h，核内不均一染色质越多，证明细胞衰老程度越重。NG：5.5mmol/L 的葡萄糖。OS：5.5mmol/L的葡萄糖+24.5mmol/L 的甘露醇。HG：30mmol/L 的葡萄糖。4.6 二甲双胍能延缓高糖诱导的 EMT 和细胞衰老，并同时激活AMPK-mTOR 信号通路


本文编号：3298715