糖基化对汉滩病毒包膜糖蛋白重组假病毒糖链结构及生物学特性影响的初步研究

发布时间：2021-07-27 09:29

　　汉坦病毒（Hantavirus）可引起两种急性病毒性传染病：一种是汉坦病毒肺综合征（Hantavirus pulmonary syndrome，HPS），另一种是肾综合征出血热（hemorrhagicfever with renal syndrome, HFRS）。其中，HFRS在我国流行范围广，发病率高，病死率也较高；另外，HFRS的传染源和宿主动物广泛，可通过多种途径传播，其防治任务十分艰巨。但由于HFRS的发病机制较为复杂，有些环节尚未研究清楚，使临床缺乏特效治疗药物，目前使用的灭活疫苗也存在不足，因此加强汉坦病毒相关的基础研究十分必要。汉坦病毒包膜糖蛋白（Glycoprotein，GP）能诱导病毒与宿主细胞发生膜融合，能刺激机体产生中和抗体，对感染动物或HFRS患者有一定的保护作用，与病毒的致病性及诱发机体产生抗病毒免疫等均有密切关系，是汉坦病毒研究中最受关注的蛋白之一。汉坦病毒Gn、Gc上均存在保守的N-糖基化位点。国内外对一些病毒的研究表明，N-糖基化对糖蛋白自身的转运、折叠，对抗原决定簇的结构、功能以及对病毒颗粒的成熟、毒力和免疫逃避等均有重要作用。但目前对汉坦病毒GP糖... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
    一、汉坦病毒包膜糖蛋白研究进展
        1.汉坦病毒的分类及基因组结构
        2.汉坦病毒颗粒及其组成
        3.汉坦病毒 GP 的分子生物学特性
    二、N-糖基化对病毒包膜糖蛋白功能影响的研究进展
        1.糖基化对相关病毒包膜糖蛋白结构与功能的影响
        2.糖基化对汉坦病毒包膜糖蛋白结构与功能的影响
        3.病毒包膜糖蛋白糖基化与蛋白功能研究的常用方法
    三、假病毒的研究进展
        1.假病毒在体内定向传递基因的应用研究
        2.假病毒在病毒受体及穿入过程研究中的应用
        3.假病毒在中和抗体研究中的应用
    四、慢病毒载体的研究进展
        1.慢病毒载体的分子改造
        2.慢病毒载体的安全性
        3.慢病毒载体的应用
    五、凝集素芯片技术在糖组学分析研究中的应用进展
        1. 凝集素芯片的基本原理
        2. 用于糖链分析的主要凝集素
        3. 凝集素芯片在糖组学研究中的应用
第一部分 含汉滩病毒M 基因或其糖基化位点突变基因重组假病毒的构建及其糖链结构的比较研究
    1 材料
        1.1 细菌及载体
        1.2 凝集素芯片
        1.3 细胞
        1.4 工具酶
        1.5 主要试剂
        1.6 培养基
        1.7 常用缓冲液系统
        1.8 主要仪器和器材
    2 方法
        2.1 HTNV Gn、Gc 编码基因即 M 片段的获得
        2.2 HTNV Gn、Gc 编码基因糖基化位点的突变
        2.3 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因表达载体的构建及鉴定
        2.4 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因重组假病毒的包装
        2.5 重组假病毒的滴度测定
        2.6 重组假病毒糖链结构的检测
        2.7 实验数据的统计与分析
    3 结果
        3.1 HTNV Gn、Gc 编码基因即 M 片段的获得
        3.2 HTNV Gn、Gc 糖基化位点的突变
        3.3 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因表达载体的鉴定结果
        3.4 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因重组假病毒的包装
        3.5 重组假病毒的滴度测定结果
        3.6 重组假病毒的蛋白定量结果
        3.7 重组假病毒的凝集素芯片检测结果
    4 讨论
        4.1 含汉滩病毒 M 基因或其糖基化位点突变基因的重组假病毒的包装
        4.2 含汉滩病毒 M 基因或其糖基化位点突变基因的重组假病毒糖链结构的比较
第二部分 含汉滩病毒 M 基因或其糖基化位点突变基因的重组假病毒感染性及免疫学特性比较研究
    1 材料
        1.1 细胞
        1.2 病毒
        1.3 动物
        1.4 抗体及主要试剂
        1.5 培养基
        1.6 主要仪器和器材
        1.7 其他常用试剂、缓冲液
    2 方法
        2.1 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因重组假病毒感染活性的比较
        2.2 免疫动物
        2.3 免疫小鼠血清中特异性抗体的检测
        2.4 微量细胞培养中和试验检测免疫小鼠血清中和抗体
        2.5 免疫小鼠细胞因子的检测
        2.6 重组假病毒免疫动物保护试验
        2.7 实验数据的统计与分析
    3 结果
        3.1 含 HTNV M 基因或其糖基化位点突变基因重组假病毒感染活性的比较结果
        3.2 免疫小鼠血清中特异性抗体的检测结果
        3.3 免疫小鼠血清中和抗体的检测结果
        3.4 免疫小鼠细胞因子的检测结果
        3.5 重组假病毒免疫动物保护试验结果
    4 讨论
        4.1 含汉滩病毒 M 基因或其糖基化位点突变基因的重组假病毒感染性的比较
        4.2 含汉滩病毒 M 基因或其糖基化位点突变基因的重组假病毒免疫原性的比较
        4.3 重组假病毒免疫对 HTNV 感染小鼠的保护作用
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]凝集素芯片技术在常见妇科肿瘤诊断中的应用[J]. 裴丽丽,肖超强,何为.  安徽医科大学学报. 2013(11)
[2]凝集素芯片在糖链结构变化检测中的应用[J]. 程莉,周树敏,郭书娟,陶生策.  生命的化学. 2013(03)
[3]N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究[J]. 张子重,汪雪,宰俊杰,孙乐强,宋云峰,陈焕春.  病毒学报. 2012(03)
[4]N-糖基化对乙型脑炎病毒感染与增殖的影响[J]. 张子重,汪雪,宋云峰,陈焕春.  农业生物技术学报. 2012(03)
[5]慢病毒载体的研究进展及应用[J]. 陈彩云,刘亚京,牛忠英.  口腔颌面修复学杂志. 2012(02)
[6]慢病毒载体的发展历程及现状[J]. 柏琦,那鑫妮,冯姗姗.  中国医药指南. 2011(23)
[7]豆科凝集素研究进展[J]. 殷晓丽,李婷婷,刘东亮,王燕,孙素荣.  中国生物工程杂志. 2011(07)
[8]流感病毒糖蛋白糖链的作用和功能研究[J]. 孙士生,王秦哲,李铮.  中国科学:化学. 2011(03)
[9]汉坦病毒包膜糖蛋白重组表达研究进展[J]. 呼延霆,薛小平,宋凯,汪桦.  实用医学杂志. 2009(20)
[10]蓖麻凝集素研究进展(综述)[J]. 杨华东,袁伟华,欧阳雪君.  亚热带植物科学. 2009(03)



本文编号：3305520