氯化锂激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠造血干/祖细胞衰老及其机制

发布时间：2021-08-07 14:26

　　目的探讨氯化锂（Li Cl）激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠Sca-1+造血干/祖细胞（Sca-1+HSC/HPC）衰老及其机制。方法免疫磁珠法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。纯化后细胞分为:正常对照组,常规培养;Li Cl组,正常对照组基础上,加入Li Cl（终浓度10mmol/L）;D-半乳糖致衰组,正常对照组基础上,加入D-半乳糖（终浓度166mmol/L）,各组培养48h。造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养检测Sca-1+HSC/HPC多向分化潜能,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测Sca-1+HSC/HPC增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测细胞衰老,免疫细胞化学染色和Western blotting检测细胞内β-catenin、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、P53、P21蛋白表达,ELISA检测细胞胞质内8羟基脱氧鸟苷（8-OH-d G）含量。结果与正常对照组相比,Li Cl组与D-半乳糖致衰组Sca-1+HSC/HPC增殖能力下降,形成CFU-Mix数量下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,β-catenin... 

【文章来源】：解剖学报. 2016,47(01)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
材料和方法
    1. 实验动物
    2. 主要试剂
    3. Sca-1+HSC / HPC分离纯化、鉴定
    4. CCK-8 检测Li Cl对Sca-1+HSC / HPC增殖能力的影响
    5. 多向造血祖细胞集落( CFU-Mix) 培养检测Li Cl对Sca-1+HSC / HPC分化能力的影响
    6. 衰老相关-β-半乳糖苷酶染色检测Li Cl对Sca-1+HSC / HPC衰老的影响
    7.激光扫描共焦显微镜检测细胞P53与β-catenin蛋白表达及定位
    8. Western blotting检测P53、P21、β-catenin及GSK-3β 蛋白表达
    9. ELISA检测上清液中8-OH-d G浓度水平
    10. 统计学分析
结果
    1. Sca-1+HSC / HPC分离纯化及鉴定
    2. 不同浓度Li Cl对Sca-1+HSC / HPC形成CFUMix的影响
    3. Li Cl对Sca-1+HSC / HPC增殖能力影响
    4. Li Cl对Sca-1+HSC / HPC的SA-β-Gal染色阳性百分率影响
    5. Li Cl对Sca-1+HSC / HPC表达P53 与 β-catenin蛋白及定位的影响
    6. Li Cl对小鼠Sca-1+HSC / HPC表达P53、P21、β-catenin、GSK-3β 蛋白的影响
    7.Li Cl对小鼠Sca-1+HSC/HPC 8-OH-d G水平的影响
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测[J]. 耿珊,张琛,刘俊,刘典锋,周玥,王亚平.  细胞与分子免疫学杂志. 2012(07)
[2]Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞衰老的影响及其作用机制[J]. 项晓霞,陈律,王骏浩,张余斌,张大勇.  浙江大学学报(医学版). 2011(06)



本文编号：3327962