丙酮酸激酶缺失诱导细胞衰老

发布时间：2021-08-22 00:58

　　细胞衰老定义为不可逆的细胞周期阻滞,在肿瘤发生,机体衰老和胚胎发育等多种生物过程中起重要作用。细胞衰老是一个复杂的过程,参与调控的因素多种多样且彼此间相互影响,构成庞大精细的调控网络。近年来,不少研究证实衰老细胞发生了显著的代谢改变,反之细胞代谢的中间产物在细胞衰老过程中也发挥重要作用。本文研究糖酵解最后一步:磷酸烯醇丙酮酸（Phosphoenolpyruvate,PEP）转变为丙酮酸（pyruvate）的限速酶-丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）。在人成纤维细胞细胞（human fiberblast,HFF）中有两种丙酮酸激酶亚型—PKM1和PKM2,由PKM基因进行不同剪切而成,其中以PKM2为主。丙酮酸激酶（M1和M2）缺失会引起人成纤维细胞发生细胞衰老,造成细胞增殖受阻,SA-β-Gal染色阳性细胞比例升高,G2/M期细胞周期阻滞,细胞呼吸作用增强和衰老相关分泌表型（SASP）因子表达增多等特征。敲降PKM激活DNA损伤反应（DDR）和p53-p21通路。细胞总活性氧（total ROS）的水平没有变化,但是线粒体活性氧（Mito ROS）在敲降PKM的HFF中... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＰＫＭ?ｓｈＲＮＡ成功降低ＨＦＦ中ＰＫＭ的表达??（Ａ）?ＨＦＦ?中?ＰＫＭｌ?和?ＰＫＭ２?ＲＮＡ?表达（＊＊，ｐ＜０．?０１，ｎ＝３）；??（Ｂ）?ＱＰＣＲ?检测?ＨＦＦ?中户Ｍ?ｓｈＲＮＡ?敲降后?ＲＮＡ?表达（＊＊，?ｐ＜０．?０１，?ｎ＝３）；??

图１?２?ｓｈＫＮＡ沉默／兄彳／后ＨＦＦ发生细胞衰老??（Ａ）感染ｓｈＲＮＡ病毒后丨丨ＦＦ的增殖能力，即随时间细胞数目变化（＊＊，?ｎ＝３）；??（Ｂ）对细胞ＳＡ?Ｐ?ｇａ】染色，观察细胞衰老情况（衰老细胞呈蓝色为阳性，胞未着色为阴性）并进行细胞计数（＊＊，?ｐ＜〇．?０１，?ｎ＝３）；??（Ｃ）流式细胞术检测细胞周期的代表图（ｎ＝３）；??（Ｄ）?ｓｅａｈｏｒｓｅ检测细胞ＯＣＲ?（有氧呼吸）和ＥＣＡＲ?（胞外酸化率，无氧呼吸）（Ｅ）衰老相关分泌表型（ＳＡＳＰｓ）中的分子ＩＩ．?１?，ＣＸＣＬ２，?Ｍ．ＭＰ３转录水ｐ＜０．?０１，?ｎ＝３）〇??由于ＰＫＭ２通常在胚胎形成，再生和肿瘤过程中表达，这暗示丙酮酸细胞活跃增殖有重要作用［５＇６］。ＨＦＦ感染ｓｈＲＮＡ病毒后，细胞出现明显的形

图１－４线粒体氧化应激增强??（Ａ）细胞总体氧化水平，左侧为代表性的流式细胞术捡测图，右侧为统计图（Ｎｏ??ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ，?ｐ＞０．?０５，?ｎ＝３）；??１９??

【参考文献】：
期刊论文
[1]模型动物——秀丽隐杆线虫研究进展[J]. 刘恩岐,仓林让.  动物科学与动物医学. 2003(10)
[2]秀丽隐杆线虫是研究发育生物学的好材料[J]. 沈静德.  生物学通报. 1991(09)

博士论文
[1]衰老细胞的代谢表型及基于FUCCI体系的分选研究[D]. 王丹丽.浙江大学 2016



本文编号：3356678