PD-L1（28-8）实验室自建平台免疫组织化学检测与性能验证

发布时间：2021-08-26 19:29

　　目的从PD-L1（28-8）浓缩型抗体性能验证角度出发,比较多平台的染色结果,旨在建立适宜的免疫组化染色条件,以满足PD-L1实验室自建平台检测（laboratory developed test, LDT）技术广泛运用的需求。方法设计扁桃体等多种正常组织块"羊膜卷"对照及高、中、低表达的肿瘤组织芯片对照,验证并确认PD-L1（28-8）在DAKO Omnis（1∶50+Linker）、Roche Ultra（1∶50+Linker）、DAKO ASL（1∶40+Linker）及手工（Manual）（1∶20+Linker）的染色条件,对已知PD-L1阳性的49例非小细胞肺癌存档蜡块进行测试,观察PD-L1（28-8）在上述四种平台染色的一致性。结果 DAKO Omnis、Roche Ultra、DAKO ASL和手工（Manual）PD-L1（28-8） LDT表达例数为:当Cutoff值1%≤TC<50%,阳性例数分别为12、13、13、14例;Cutoff值TC≥50%时,阳性例数分别为24、23、23、11例;Cutoff值TC<1%时,在DAKO Omnis、Ro... 

【文章来源】：临床与实验病理学杂志. 2019,35(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

PD-L1(28-8)DAKO ASL48设备平台验证结果，DAKO ASL48(1∶40+Linker)染色

Scheel等[7]研究11种PD-L1 LDT方案中有6种结果与PD-L1(28-8)和PD-L1(22C3)试剂盒相似。Velcheti等[8]在一项多样本回顾性研究中发现，PD-L1 LDT检测差异无显著性。Adam等[9]则认为LDT与3种(含28-8)标准商业试剂盒方法相比，具有不同程度的一致性。一项对68个独立实验室进行的PD-L1 PharmDx试剂盒与LDT研究比对，LDT具有较高的合格率[10];上述研究均表明基于有效性能验证来确认PD-L1的LDT具有可行性[7-10]。本实验选择已经确诊为SP142阳性TC表达的存档蜡块进行28-8的LDT检测，是为了富集可能PD-L1(28-8)阳性病例，从而观察PD-L1(28-8)LDT检测在各平台特异性表达数量的一致性。LDT采用具有检测下限成分(LLOD)的关键组织来评估抗体敏感度,是判定LDT最佳染色条件的依据[11]。本实验结合NordiQC推荐[12],在性能验证对照环节,充分考虑低水平抗原(巨噬细胞)设计,采用正常多组织对照(肝脏、肾脏、肺、胎盘、扁桃体等)和多点肿瘤芯片的肿瘤细胞中PD-L1呈高、中、低表达,提前切制裱贴在同张检测样本切片上。PD-L1(28-8)质量浓度偏低(0.05 μg/mL,Abcam公司),基于需要呈现低倍镜下可见扁桃体滤泡中巨噬细胞软膜状着色的检测基线(“金标准”),DAKO ASL48平台的条件从稀释度1 ∶50提升至1 ∶40。结合PD-L1推荐条件以及文献LDT结果[5-10,13-14],自动化设备平台运用Linker增强条件检测,染色信号可呈多级放大,具有更高的一致性。非DAKO ASL48平台PD-L1比对时,因各设备端绑定的二抗检测体系不同,与一抗结合的亲和力系数不一样,所结合的一抗最适浓度会有变化[15-16]。本实验PD-L1(28-8) LDT在有Linker的平台上得到36例共表达,表达一致性较好(秩相关系数r>0.9),具有较高的判读一致性并与文献报道一致[16-17],提示PD-L1(28-8)LDT检测适用于带放大扩增系统的检测平台;手工(Manual)检测相比设备平台阴性例数过多(24 vs 13),通过定时显色对比,仍然发现肿瘤细胞染色不足,考虑可能存在Linker组份(采用DAKO ASL48平台信号放大试剂)兼容性问题。本实验结果显示49例PD-L1(SP142)表达归档病例中出现13例PD-L1(28-8)不表达,与蓝印计划观点一致[13-14],PD-L1(28-8)和PD-L1(SP142)两者不能替代。

【参考文献】：
期刊论文
[1]RNAscope技术在非小细胞肺癌PD-1、PD-L1表达分析中的应用价值[J]. 王珊,董丽儒,任会强,熊艳杰,刘爱东,唐慧,宋旭东.  临床与实验病理学杂志. 2018(09)
[2]品质管理圈在降低病理科报告延发率中的作用[J]. 朱宁,付尧,陈洁宇,樊祥山.  临床与实验病理学杂志. 2017(12)



本文编号：3364832