艰难梭菌二元毒素A的原核表达及免疫原性分析

发布时间：2022-01-07 09:36

　　目的构建艰难梭菌二元毒素（Cdt）A的原核表达载体,表达并纯化His-CdtA重组蛋白,分析其免疫原性。方法以RT 027型艰难梭菌为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增cdtA的全长序列,导入大肠埃希菌BL21感受态细胞,诱导His-CdtA重组蛋白表达,并用纯化后的蛋白免疫小鼠,分析小鼠产生的抗体效价。结果成功构建pET-28b-cdtA原核表达载体,诱导并纯化出高浓度的His-CdtA重组蛋白,免疫小鼠后产生高效价的抗CdtA抗体。结论纯化的His-CdtA重组蛋白免疫小鼠产生了高效价的抗CdtA抗体,为后续制备抗CdtA单克隆抗体及建立CdtA的实验室检测方法学奠定了基础。 

【文章来源】：检验医学. 2020,35(02)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

菌液PCR鉴定pET-28b-cdtA的琼脂糖凝胶电泳图

收集各浓度咪唑洗脱液行S D S-PAG E（图5）。上样穿透液（泳道2）目的蛋白明显减少，说明His-Cdt A重组蛋白已成功与镍柱结合，当洗脱液咪唑浓度为10 m mol/L时能有效洗脱杂蛋白（泳道3），直到浓度达到200 mmol/L时才能成功洗下目的蛋白（泳道6）。最终确定本研究His-CdtA重组蛋白的最佳纯化条件为：咪唑浓度为10 mmol/L时洗脱杂蛋白，咪唑浓度为200 mmol/L时完全洗脱His-CdtA目的蛋白。另外，pET-28b自身携带His标签，用相同条件表达纯化后虽然也有低浓度的蛋白被纯化，但与His-CdtA目的蛋白大小不一致（图4），进一步验证His-CdtA重组蛋白非载体自身表达蛋白。图4 镍柱亲和层析纯化产物的SDS-PAGE图

镍柱亲和层析纯化产物的SDS-PAGE图

【参考文献】：
期刊论文
[1]老年人群分离艰难梭菌分子型别特征研究[J]. 张文竹,闫中强,李文革,周玉,龚美亮,徐雅萍,吴媛,卢金星.  中华医院感染学杂志. 2018(08)
[2]艰难梭菌毒力与芽孢研究进展[J]. 刘思娣,吴安华.  中国感染控制杂志. 2016(06)



本文编号：3574300