流行我国优势基因型弓形虫株毒力及其棒状体蛋白ROP5和ROP18蛋白序列差异研究

发布时间：2023-06-08 20:58

　　目的分析流行我国优势基因Chinese 1弓形虫株WH3株和Wh6株,相关毒力因子ROP5和ROP18的蛋白序列差异,为研究其致病机制奠定基础。方法分别复苏将本室保存的WH3株和RH株弓形虫虫株,接种4-6w龄昆明小鼠,待其急性发病后,收集腹水并分别纯化WH3株和RH株速殖子;分别从本室饲养的保种昆明小鼠脑内分离出Wh6株和PRU株弓形虫包囊,接种4-6w龄昆明小鼠,待其急性发病后,收集腹水并分别纯化WH6株和PRU株速殖子。上述4个虫株1×10³个速殖子分别感染40只SPF级BALB/c小鼠和40只昆明小鼠,观察其存活时间和存活率,分析毒力强弱。提取上述4株弓形虫的总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,PCR扩增出弓形虫棒状体蛋白家族的毒力相关效应分子ROP5和ROP18的全长;将PCR扩增出产物测序,测序结果由核苷酸序列转换为氨基酸序列,分析比较其蛋白水平的遗传序列差异。结果本室保种4株弓形虫株中,Chinese 1基因型WH3株和I型虫株RH株对BALB/c小鼠和昆明小鼠均有较强的毒性,BALB/c小鼠在感染WH3株和RH株后5-7 d均100%死亡,而昆...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 虫株
        2.1.3 扩增引物
        2.1.4 试剂及来源
        2.1.5 部分试剂的配置
        2.1.6 实验所用仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 弓形虫Wh3株和RH株的速殖子的获取与纯化
        2.2.2 弓形虫Wh6株和PRU株的速殖子的获取与纯化
        2.2.3 四株T.gondii的毒力检测
        2.2.4 各虫株总RNA提取
        2.2.5 弓形虫株cDNA的合成
        2.2.6 毒力相关基因ROP5和ROP18扩增
    2.3 统计学处理
3 结果
    3.1 四个T.gondii虫株毒力
    3.2 毒力相关基因扩增结果
    3.3 毒力相关基因比对结果分析
4 讨论
5 结论
参考文献
附录一 个人简历
附录二 致谢
附录三 综述
    参考文献



本文编号：3832484