一株人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的表位及中和活性的研究

发布时间：2023-12-10 08:58

　　目的通过ELISA相加试验和狂犬病毒(Rabies virus,RV)逃逸突变试验对一株人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(human anti-rabies virus monoclonal antibody,Ab1)进行抗原表位分析。方法将已知表位的对照抗体(CR57和CR4098)和Ab1进行ELISA相加试验;以及对RV逃逸株氨基酸突变位点分析进一步验证Ab1针对的抗原表位,用小鼠中和试验(mouse neutralization test,MNT)分析Ab1的体内抗狂犬病病毒中和活性。结果 Ab1和CR57可同时与RV结合;与CR4098存在竞争,Ab1的逃逸株在氨基酸位点333、336发生突变,MNT检测体内中和活性为550.32 IU/mg,MNT和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)结果基本一致。结论该抗体针对III号抗原表位且具有较高的抗狂犬病病毒中和活性。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒种、细胞
    1.2 载体
    1.3 参照抗体及引物
    1.4 主要试剂及仪器
    1.5 ELISA相加试验
        1.5.1 测定参照抗体和人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的饱和曲线
        1.5.2 相加指数(AI)的测定
    1.6 狂犬病毒逃逸突变试验
        1.6.1 狂犬病毒逃逸株的获得
        1.6.2 狂犬病毒逃逸株RNA的提取、cDNA的合成和PCR扩增狂犬病毒糖蛋白
        1.6.3 狂犬病毒逃逸株氨基酸突变位点分析
    1.7 人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(Ab1)体内中和活性验证
        1.7.1 病毒悬液毒力的预测
        1.7.2 中和活性测定
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 参照抗体(CR57和CR4098)与抗体(Ab1)的饱和曲线的测定
    2.2 抗体结合位点分析
    2.3 狂犬病毒糖蛋白的扩增及鉴定
    2.4 Ab1逃逸株氨基酸突变位点分析
    2.5 体内中和活性验证
3 讨论



本文编号：3872190