人TBC1D10C基因过表达慢病毒载体的构建及功能鉴定

发布时间：2024-04-02 22:36

　　目的构建人TBC1D10C(hTBC1D10C)基因过表达慢病毒载体,并对其进行功能鉴定。方法利用PCR技术扩增hTBC1D10C基因片段,构建pLVX-hTBC1D10C-mCMVZsGreen-PGK-Puro过表达载体质粒,将构建的过表达载体质粒和系统包装质粒应用高效转染试剂盒转染至293T细胞,以包装rLV-hTBC1D10C-zpp,在HEK293细胞中检测病毒滴度。rLV-hTBC1D10C-zpp感染H9C2心肌细胞,蛋白免疫印迹法检测hTBC1D10C蛋白表达。结果 pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro过表达质粒构建成功,rLV-hTBC1D10C-zpp包装顺利,滴度为1×10⁸ TU/ml,感染H9C2心肌细胞后,hTBC1D10C蛋白表达上调(P <0.05)。结论 rLV-hTBC1D10C-zpp构建成功,在心肌细胞中具有高效表达hTBC1D10C的效应。

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【文章目录】：
材料与方法
    一、材料
        1. 材料
        2. 主要试剂及仪器
        3. 引物设计及合成
    二、方法
        1.pLVX-h TBC1D10C-m CMV-Zs Green-PGK-Puro载体的构建
        2. rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包装、收集、扩增及滴度测定
        3. rLV-hTBC1D10C-zpp功能鉴定
    三、统计学处理
结果
    一、pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro载体的构建
    二、rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包装、收集、扩增及滴度测定
    三、rLV-hTBC1D10C-zpp功能鉴定
讨论



本文编号：3946306