miR-148b/DUSP1调节巨噬细胞分泌细胞因子CD206促进肝癌的发生

发布时间：2024-06-29 03:43

　　目的探讨miR-148b/DUSP1信号通路调节巨噬细胞分泌细胞因子CD206的表达对肝癌发生的影响。方法利用全自动磁珠提取纯化系统提取外周血单核细胞并培养,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)分别诱导生成M1型和M2型巨噬细胞,CD68、CD206进行表型鉴定,ELISA检测M1和M2型巨噬细胞分泌的细胞因子CD206的表达,CCK-8和Transwell实验检测巨噬细胞分泌细胞因子CD206对肝癌细胞(Hep G2和Huh7细胞)增殖、侵袭、转移的影响,双荧光素酶报告基因系统验证miR-148b与DUSP1的靶向结合。结果初步分离并鉴定M1和M2型巨噬细胞,M2型巨噬细胞分泌的细胞因子CD206促进肝癌细胞的生长和侵袭、转移,双荧光素酶报告基因证实DUSP1为miR-148b的靶基因,miR-148b/DUSP1信号通路促进肝癌的发生、发展,巨噬细胞标志物与肝癌患者的...

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【部分图文】：

图1倒置显微镜观察M1和M2型巨噬细胞形态

LGiemsa染液的孔中，室温染色15～30min;轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出小室，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞;用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片;显微镜下取9个随机视野计数，统计结果。1．10统计学处理实验至少重复3次，数据....

图3Transwell实验检测与巨噬细胞共培养对肝癌细胞侵袭、转移的影响(×400)

显示，M2型巨噬细胞能明显促进肝癌细胞的生长(P＜0．05，图2)。为了检测巨噬细胞否对肝癌细胞的侵袭转移产生影响，Transwell实验发现M2型细胞也可以促进肝癌细胞的侵袭与转移(P＜0．05，图3)。AB57.2μm57.2μmA:M1型;B:M2型图1倒置显微镜观察M1和....

图5M2巨噬细胞中转染DUSP1-shＲNA抑制其表达

调节细胞因子CD206的分泌;CCK-8实验结果显示，转染miＲ-148binhibitor可以抑制肝癌细胞HepG2和Huh7的生长(P＜0．05)，而共转染miＲ-148binhibitor和DUSP1-shＲNA后，分泌量增加的CD206可以促进细胞生长(P＜0.05，图6....

图1倒置显微镜观察M1和M2型巨噬细胞形态

LGiemsa染液的孔中，室温染色15～30min;轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出小室，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞;用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片;显微镜下取9个随机视野计数，统计结果。1．10统计学处理实验至少重复3次，数据....

本文编号：3997114