vMIP-Ⅱ在大肠杆菌表达、纯化的条件优化及活性鉴定

发布时间：2020-12-10 13:38

　　目的：本研究主要对病毒基因来源的人趋化因子同源物vMIP-Ⅱ在原核细胞的表达及纯化条件进行优化，并对其活性进行鉴定，为大量获取单链vMIP-Ⅱ和将其用于趋化因子受体封闭因子的临床应用打下基础。 方法：本实验对已克隆转化的菌株进行诱导，并用Amylose resin亲和纯化目的蛋白，再经SDS-PAGE和Western blot分析纯化结果，以Transwell趋化小室和FN包被的96孔板对vMIP-Ⅱ的生物学活性进行鉴定。用MTT法检测vMIP-Ⅱ对外周血单个核细胞的毒性及对细胞增殖的影响。 结果：vMIP-Ⅱ／MBP融合蛋白在大肠杆菌中呈高效分泌型表达，SDS-PAEG可见在54KD位置有一明显的诱导表达条带。最佳诱导条件为：TB培养基、0.3mmol／L IPTG、28℃诱导4h。免疫印记结果显示在54KD位置有一明显的蓝染条带。该菌的最佳纯化条件为：30％的P₂缓冲液，MgSO₄用量为50ml／g湿菌，浓度为5mmol／L。该法获得的融合蛋白酶切后得到的单体活性较高，对PBMC趋化、黏附特性的抑制率达50％以上。vMIP-Ⅱ... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MBP融合蛋白亲和层析

图5vMIP一11免疫印记和纯化条件的优化gSO;对细胞破碎及纯化的影响6所示，随着所用MgS04体积的增加mUg湿菌Mgso;破碎体积水平浓度图7)，故上清杂蛋白浓度较高可能与，亲和层析所得融合蛋白的量较低，有关。表1不同体积MgSO;不同体积Mgso

PBMC吉姆萨染色形态观察

【参考文献】：
期刊论文
[1]分子伴侣的多重功能[J]. 俞峻,马康涛.  生物化学与生物物理进展. 1998(02)
[2]外源基因在大肠杆菌中表达的研究进展[J]. 龙建银,王会信.  生物化学与生物物理进展. 1997(02)



本文编号：2908789