基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示制备生存素抗体及其鉴定

发布时间：2022-12-10 19:04

　　目的:通过纳米抗体CDR3区展示生存素N端表位的方式,探索纳米抗体在抗原表位展示中的作用。方法:通过基因合成方法将生存素N端起始表位（氨基酸序列1～15）插入纳米抗体CDR3区,再构建到原核表达载体pET24a中,IPTG诱导表达,用带His标签的填料纯化,获得高纯度的目的蛋白,免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA检测5次免疫后的效价,用抗原偶联纯化介质纯化免疫多抗,Western印迹检测多抗特异性。结果:IPTG诱导后,目的蛋白主要以包涵体形式存在,亲和层析获得纯度大于96%的目的蛋白,包涵体经复性后免疫小鼠,效价可达1∶512 000,Western印迹特异性检测显示免疫多抗能够特异性结合生存素。结论:纳米抗体CDR3区生存素抗原N端表位展示的方法可用于抗生存素抗体的制备,并为今后纳米抗体表位展示相关研究奠定基础。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 生存素表位选择与Nb-SurvivinE基因合成
    1.3 Nb-survivinE原核表达载体构建、表达、纯化
    1.4 Nb-SurvivinE免疫及血清效价检测
    1.5 Nb-survivinE多抗纯化及效价检测
    1.6 Western印迹检测Nb-survivinE多抗特异性
2 结果
    2.1 Nb-SurvivinE载体构建及鉴定
    2.2 Nb-SurvivinE表达及纯化
    2.3 Nb-survivinE血清效价检测
    2.4 Nb-SurvivinE免疫血清纯化及检测
    2.5 Western印迹鉴定Nb-SurvivinE多抗特异性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]G250纳米抗体靶向的载药纳米微泡抑制肾癌细胞生长的实验研究[J]. 余志平,胡明,王洛夫,郭燕丽,江军,兰卫华,徐丹,朱连华.  第三军医大学学报. 2018(24)



本文编号：3717347