广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克

发布时间：2023-03-05 09:16

　　目的通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能。方法根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化树分析;制备Ac-ALMP多抗血清,对广州管圆线虫L1,感染期L3和成虫进行免疫组织定位,通过Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析。结果获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全基因序列,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。进化树分析Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性较高。免疫荧光定位分析Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道)。定量分析显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量较高,L3次之。结论成功对Ac-ALMP蛋白进行了原核及真核表达,定量分析Ac-ALMP在虫体的肠道、角质层、精巢、体壁等均有分布,推测Ac-ALMP在广州管圆线虫寄生过程中起重要作用,可为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考。

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 虫卵和菌体
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 广州管圆线虫RNA的提取及cDNA的合成
        2.2 RACE-cDNA的合成及目的基因做PCR扩增
        2.3 Ac-ALMP蛋白的原核表达
        2.4 目的蛋白Western blot分析
        2.5 Ac-ALMP蛋白的真核表达
        2.6 多克隆抗血清制备
        2.7 细胞免疫荧光试验
        2.8 统计学处理
结 果
    1 广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全基因的获取
    2 Ac-ALMP生物信息学分析
    3 Ac-ALMP原核及真核表达克隆构建
    4 Ac-ALMP蛋白的表达及验证
    5 Ac-ALMP在广州管圆线虫各期的表达分析
    6 Ac-ALMP在广州管圆线虫各发育期的荧光定位
讨 论



本文编号：3755922