金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究

发布时间：2023-04-07 06:18

　　金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus)可引起一系列不同程度的感染；一个不太严重的伤口感染可发展为恶性的败血症、骨髓炎、脓毒性关节炎或是心内膜炎。S.aureus更是医院感染中最常见的病原菌之一。甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)菌株，可抵抗大多数临床上应用的抗生素。令人忧虑的是，MRSA菌株对治疗葡萄球菌感染最为有效的抗生素——万古霉素的敏感性日益降低，这些对万古霉素不敏感的金黄色葡萄球菌(Vancomysin-intermediate S.aureus，VISA)菌株的出现使人们产生了金葡菌感染不能治愈的恐惧感，因此必须寻找到一种有效的治疗方法。 研究表明，基于金葡菌细胞外结合基质蛋白(ECMBPs)的重组蛋白疫苗对于机体更有保护效果。基于PCR技术，分别扩增了纤连蛋白结合蛋白(FnBP)和胶原蛋白结合蛋白(Cna)的基因fnb和cna。并克隆于原核表达载体pET-32a(+)，分别构建了融合基因表达质粒trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 文献综述
    1.1 寻求新的抗S.aureus感染的疫苗
    1.2 细胞外结合基质蛋白(ECMBPs)
    1.3 ECMBPs是真正的毒力因子吗
    1.4 几种重要的MSCRAMMs
2 选题依据
3 实验研究
    3.1 金葡球菌表面蛋白cna，fnb基因在大肠杆菌中的克隆表达、纯化
        3.1.1 材料
        3.1.2 仪器
        3.1.3 方法
    3.2 金黄色葡萄球菌表面蛋白can-fnb基因在大肠杆菌中的融合表达
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 Trx-FnBP、Cna、Trx-Cna、TrxCn-fnBP蛋白免疫效应研究
        3.3.1 材料
        3.3.2 实验方法
4 实验结果
    4.1 金葡球菌表面蛋白cna，fnb基因在大肠杆菌中的克隆表达、纯化结果
        4.1.1 目的基因的扩增
        4.1.2 fnb-T质粒，cna-T质粒的构建
        4.1.3 序列测定
        4.1.4 表达质粒trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32a(+)的构建
        4.1.5 重组trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32a(+)的表达
        4.1.6 蛋白纯化结果
        4.1.7 纯化蛋白的定量
    4.2 金葡菌表面蛋白can-fnb基因在大肠杆菌中的融合表达、纯化结果
        4.2.1 目的基因的扩增
        4.2.2 Cna+fnb-T质粒的构建
        4.2.3 序列测定及分析
        4.2.4 Cna+fnb-pET-32a(+)质粒的构建
        4.2.5 Cna-fnBP蛋白的表达结果
        4.2.6 Cna-fnBP蛋白的纯化
        4.2.7 Cna-fnBP蛋白的定量结果
    4.3 金黄色葡萄球菌表面蛋白免疫效应结果分析
        4.3.1 免疫Balb／c雌性小鼠血清抗体滴度变化
        4.3.2 免疫小鼠脾淋巴细胞增殖实验
        4.3.3 中性粒细胞的调理吞噬作用
        4.3.4 免疫保护实验
        4.3.5 Western Blot分析
5 讨论
    5.1 引物的设计及PCR反应条件的优化
    5.2 表达载体的选择
    5.3 ECMBPs作为疫苗的研究
    5.4 靶抗原基因的融合是新型疫苗发展的新方向
    5.5 间接ELISA测抗体效价结果分析
    5.6 动物免疫保护实验方案
总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的科研成果



本文编号：3785260