甲基结合蛋白1对小鼠胚胎干细胞增殖及克隆形态的影响

发布时间：2023-04-14 20:42

　　目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培养7 d,挑取单克隆细胞,采用PCR法筛选敲除Mbd1的纯合子细胞,观察Mbd1缺失对小鼠胚胎干细胞克隆形态的影响;使用细胞计数法检验Mbd1对胚胎干细胞增殖的影响。结果:通过Cripsr/Cas9成功获得敲除Mbd1的胚胎干细胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干细胞丧失了常规小鼠胚胎干细胞的3D克隆形态,细胞呈现单层扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干细胞增殖速率变慢。结论:Mbd1通过影响小鼠胚胎干细胞克隆形态和增殖而影响胚胎干细胞的多能性。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 gRNA设计及克隆
        1.2.2 小鼠胚胎干细胞培养及质粒转染
        1.2.3 基因敲除细胞的鉴定
        1.2.4 胚胎干细胞克隆形态的观察
        1.2.5 Mbd1蛋白检测
2 结果
    2.1 通过Crispr/Cas9技术获得敲除Mbd1的小鼠胚胎干细胞
    2.2 敲除Mbd1的胚胎干细胞丧失了小鼠胚胎干细胞经典的3D克隆形态
    2.3 敲除Mbd1对小鼠胚胎干细胞增殖的影响
3 讨论



本文编号：3790815