甲醇诱导条件对登革病毒四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区表达的影响

发布时间：2023-04-23 14:02

　　目的探讨甲醇诱导浓度和诱导时间对登革病毒(dengue virus,DENV)四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区(envelope domainⅢ,EDⅢ)表达的影响,以期实现该蛋白在毕赤酵母中的高效表达。方法采用不同浓度甲醇(0. 05%、0. 1%、0. 25%、0. 5%、0. 75%、1%、1. 5%、2%、2. 5%、3%、5%、7. 5%)诱导表达带His标签的DENV四型联合重组EDⅢ蛋白,分别诱导18、24、30、48、72 h,样品经Western blot检测。最佳条件下诱导表达的蛋白液经Ni-Agarose His亲和层析纯化后,进行10%SDS-PAGE检测。结果最佳甲醇诱导浓度为2. 5%,最佳甲醇诱导时间为72 h。纯化产物经10%SDS-PAGE检测,于相对分子质量约41 000处可见单一目的蛋白条带,纯度为99%。结论当甲醇浓度为2. 5%,诱导时间为72 h时,可实现DENV四型联合重组EDⅢ蛋白在毕赤酵母中的高效表达。

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株
    1.2 主要试剂
    1.3 甲醇诱导DENV四型联合重组EDⅢ蛋白表达条件的优化
        1.3.1 甲醇诱导浓度
        1.3.2 甲醇诱导时间
    1.4 酵母菌体蛋白的提取
    1.5 菌体蛋白的鉴定
    1.6 蛋白的纯化及鉴定
2 结果
    2.1 甲醇诱导DENV四型联合重组EDⅢ蛋白的最适表达条件
        2.1.1 甲醇诱导浓度
        2.1.2 甲醇诱导时间
    2.2 DENV四型联合重组EDⅢ蛋白的纯化
3 讨论



本文编号：3799854