聚合酶链反应中抑制物的检测及去除方法研究

发布时间：2023-06-01 05:39

　　目的：恶性淋巴瘤一直是病理诊断的难点。PCR以其快速、灵敏、易于操作等优点成为众多领域的首选技术。近年来，PCR检测基因重排已经成为淋巴瘤诊断不可缺少的手段。然而，假阴性一直是困扰PCR结果的问题之一。尤其是由于PCR抑制物的存在，常常导致PCR出现假阴性结果，影响淋巴瘤的正确诊断。目前，关于抑制物问题，国内尚未见系统研究。因此，如何检出DNA模板中抑制物的存在，通过必要的方法使之去除，同时探究导致PCR假阴性的其他因素，改进固定、DNA提取以及PCR反应中的不适环节，从而提高基因重排的阳性率，成为本课题研究的重点内容。 方法：(1)构建一含有β-globin基因片段的重组质粒，作为检测DNA提取物中是否含有PCR抑制物的内对照，在PCR反应中作为目的基因扩增的模板。选取以淋巴组织为主的新鲜及石蜡组织进行分组，有目的地对新切蜡片和陈旧蜡片设立对照，常规PCR筛查阴性标本，加入内对照体系检测抑制作用的有无。(2)以淋巴瘤细胞系DG75细胞DNA作为PCR反应的模板，选择固定、包埋、HE染色以及消化裂解法、酚／氯仿抽提法提取DNA过程中所用化学试剂10％福尔马林，95％乙醇，二甲苯...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词（Abbreviation）
中文摘要（Abstract in Chinese）
英文摘要（Abstract in English）
前言（Preface）
第一部分： 福尔马林固定石蜡包埋组织中PCR抑制物的初步探究（A Tentative Study of Inhibitors in PCR about Formalin Fixed Paraffin-Embedded Tissues）
    材料与方法（Materials And Methods）
    结果（Results）
    讨论（Discussion）
第二部分： 影响PCR部分因素分析与抑制物去除的方法研究（Analysis of Partial Factors Influencing PCR And Methodological Study of Removing of Inhibitors in PCR）
    材料与方法（Materials And Methods）
    结果（Results）
    讨论（Discussion）
全文小结（A Brief Sum-up）
参考文献（References）
综述（Summary）
    参考文献（References）
论文情况（About Treatise）
致谢（Acknowledgment）



本文编号：3826725