人脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及其溶血性能研究

发布时间：2023-06-03 11:17

　　目的:分离并鉴定人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC)分泌的外泌体,研究其对人血的溶血性能。方法:通过超速离心法从脐带干细胞培养上清中分离外泌体,采用蛋白免疫印迹法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;制备人红细胞悬液,加入不同浓度外泌体,进行溶血试验,用试管法观察并用紫外分光光度法测定计算溶血度。结果:分离获得的外泌体特异富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高尔基体蛋白Gm130;透射电镜下可见其呈杯盘状结构,粒径直径为40～120 nm;脐带干细胞外泌体对人血的溶血率小于5%。结论:HUCMSC分泌的外泌体具有外泌体的经典结构及典型特征,不引起人血溶血反应,为未来脐带干细胞外泌体作为载体进行药物递送提供了实验依据。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 HUCMSC的分离培养
        1.2.2 HUCMSC的诱导分化
        1.2.3 HUCMSC的流式细胞学检测
        1.2.4 去外泌体胎牛血清的制备
        1.2.5 脐带干细胞外泌体的提取
        1.2.6 外泌体蛋白的检测
        1.2.7 外泌体纳米粒径的检测
        1.2.8 透射电镜检测外泌体形态
        1.2.9 人红细胞生理盐水悬液的制备
        1.2.1 0 常规体外溶血实验
        1.2.1 1 紫外分光光度法检测溶血情况
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 HUCMSC的形态学特征
    2.2 HUCMSC的多向诱导分化
    2.3 HUCMSC表面标志的鉴定
    2.4 HUCMSC外泌体的鉴定
    2.5 HUCMSC体外溶血试验观察
    2.6 HUCMSC溶血试验吸光度比较及溶血率计算
3 讨论



本文编号：3829232