作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶(EmGalase)的鉴定和研究

发布时间：2024-02-13 20:52

　　对脑膜炎败血伊丽莎白金菌进行糖苷酶功能基因组分析发现,该菌存在一个GH27家族α-半乳糖苷酶基因。克隆该基因并表达蛋白后,利用人工合成的pNP底物研究其酶学性质,发现该酶具有α连接的半乳糖(α-galactose,α-Gal)底物特异性,酶反应pH为3.0～8.0,反应温度为4～45℃。用不同寡糖底物进一步确定,该酶能够酶切直链末端α-1,3、1,4、1,6Gal。在猪红细胞上进行的酶切实验显示,该酶能够高效清除存在于猪红细胞表面的末端Galα1-3Gal表位。末端α-半乳糖基化修饰在免疫与感染中发挥着重要的生物学作用,作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶的发现将为该领域的研究提供一个新的工具,为缓解异种输血中的超急性免疫排斥反应提供一种可能。

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【部分图文】：

图２ＥｍＧａｌａｓｅ纯化及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析Ｌａｎｅ１：ＰａｇｅＲｕｌｅｒＰｒｅｓｔａｉｎｅｄＰｒｏｔｅｉｎＬａｄｄｅｒ．Ｌａｎｅｓ２，３

２ｍｇ／ｍＬ（ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ蛋白定量分析试剂盒测定）。图１ＥｍＧａｌａｓｅ与代表性α－半乳糖苷酶的系统发生树分析Ｆｉｇ．１ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆＥｍＧａｌａｓｅｉｎｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅａｌｐｈａｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＬａｎｅ１：ＰａｇｅＲｕｌｅｒＰｒ....

图３ＥｍＧａｌａｓｅ与ｐＮＰ底物的反应Ｆｉｇ．３ＴｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＥｍＧａｌａｓｅａｎｄｐＮＰｓｕｂｓｔｒａｔｅ

ＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＥｍＧａｌａｓｅ２．２ＥｍＧａｌａｓｅ的酶学性质为验证ＥｍＧａｌａｓｅ是否具有α－半乳糖苷酶活性，我们用纯化的ＥｍＧａｌａｓｅ处理人工合成的ｐＮＰ单糖底物。结果显示ＥｍＧａｌａｓｅ可水解ｐＮＰ－α－Ｇａｌ，但对其他底物无反应性，提示ＥｍＧａ....

图６ＥｍＧａ?Ａ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（ｉｓｏｇｌｏｂｏｔｒｉｏｓｅ）

Ａ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（ｉｓｏｇｌｏｂｏｔｒｉｏｓｅ）．Ｂ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－４Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（Ｐｋａｎｔｉｇｅｎ）．Ｃ：Ｂｅｆｏｒ....

本文编号：3897187