猪肝羧酸酯酶1水解磺胺类药物的特性研究

发布时间：2024-02-20 12:18

　　猪肝羧酸酯酶(Pig liver esterase, PLE),属于丝氨酸蛋白酶,是由多种同工酶组成的酶家族,其中猪肝羧酸酯酶1(PLE1)含量较高,是该家族的重要成员。PLE具有高度的水解活性和立体选择性,成为有机合成中主要的水解酶之一。但PLE作为药物代谢酶的角色,在猪的药物代谢和解毒中是否发挥作用尚未见报道。据其在有机化学合成中显示出的强大水解活性,以及人类CES显示出的重要药物代谢和解毒作用,推测PLE可能在猪用药物代谢中发挥不可忽视的作用,并由此影响药物的疗效和毒副作用,因此,本课题拟研究PLE1是否水解临床兽药、水解特点及机制,为猪临床合理用药提供必要的理论依据,具有重要的理论和实践意义。 本课题在功能性表达PLE1的基础上,首先通过PLE1的体外水解抑制试验,快速检测了83种临床上常用的各种类型兽药对PLE1水解p-NPA的抑制作用,以筛选获得可能被PLE1水解的兽药种类；测定了兽药对PLE1的抑制常数,以确定抑制类型,进一步预测药物被PLE1水解的可能性；建立高效液相色谱(HPLC)及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)等仪器分析方法,定量检测PLE1对兽药的水解,确...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语(Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 药物代谢
        1.1.1 概述
        1.1.2 药物的生物转化
    1.2 药物代谢酶
    1.3 羧酸酯酶
        1.3.1 概述
        1.3.2 羧酸酯酶的命名
        1.3.3 羧酸酯酶的基因结构
        1.3.4 羧酸酯酶的结构
        1.3.5 羧酸酯酶的催化机理
        1.3.6 羧酸酯酶的功能
        1.3.7 羧酸酯酶的诱导表达
        1.3.8 羧酸酯酶的抑制剂
    1.4 猪肝羧酸酯酶
        1.4.1 概述
        1.4.2 猪肝接酸醋酶同工酶
        1.4.3 猪肝羧酸酯酶的结构
    1.5 横胺类药物及其分析方法
        1.5.1 磺胺类药物概述
        1.5.2 磺胺类药物检测方法
        1.5.3 液相色谱串联质谱在磺胺类药物检测分析中的应用
2 研究目的与意义
3 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 药物标准品
        3.1.2 其他试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 试剂配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 体外酶水解抑制试验
        3.2.2 HPLC测定酶对泰乐菌素作用
        3.2.3 抑制常数的测定与分配系数的获取
        3.2.4 LC-MS/MS定酶对磺胺类的降解
        3.2.5 同源模建及分子对接
4 结果与分析
    4.1 药物抑制PLE1水解p-NPA的情况
    4.2 PLE1对泰乐菌素作用的研究
        4.2.1 泰乐菌素高效液相条件的优化
        4.2.2 泰乐菌素的水解情况
    4.3 磺胺类药物抑制常数的测定与分配系数的确定
        4.3.1 抑制常数K_i的测定结果
        4.3.2 分配系数XlogP值的确定
        4.3.3 药物logK_i值与XlogP值相关性分析
    4.4 LC-MS/MS测定PLE1对磺胺类的降解
        4.4.1 LC-MS/MS质谱优化结果
        4.4.2 典型色谱图
        4.4.3 药物浓度与响应值线性关系
        4.4.4 米氏常数与最大反应速率
        4.4.5 米氏常数与抑制常数相关性分析
    4.5 同源模建及分子对接
        4.5.1 同源模建
        4.5.2 分子对接
        4.5.3 结合能量的测定
5 讨论
    5.1 药物的初步筛选
    5.2 药物分析方法的选择
    5.3 药物理化参数XlogP的选择
    5.4 酶与小分子作用机理
    5.5 磺胺类药物代谢及其对疗效的影响
6 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3904158