构建BVDV-NS5B稳定表达的细胞系

发布时间：2024-02-20 22:21

　　牛病毒性腹泻(亦称粘膜病)是世界动物卫生组织(Office International desépizooties,OIE)必须上报的传染病之一。其病原是牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)。BVDV为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的代表成员。BVDV能感染的动物主要包括牛、羊和猪等,最近发现BVDV也能感染小鼠。但是其天然宿主为牛,尤其是幼龄牛的易感性最高。感染BVDV之后引起牛发病,产生的症状不一,有的急性感染,损伤牛的健康,重症者死亡;有的持续感染,无明显症状,却成为主要的传染源,并且由于免疫抑制作用,导致继发其他疾病而放大其危害。目前在防控BVDV方面,欧美国家已经积累了较丰富的经验,主要采用“筛查+淘汰”和“免疫+淘汰”两种净化策略。前者建立在有效的诊断基础之上,且淘汰成本高;后者依赖高效的疫苗免疫,适用于养牛密度高,且BVDV流行率高的地区。因此,第二种策略较适应我国当前情况。要很好地控制在我国BVDV的流行,研究和生产高效疫苗成为当务之急。BVDV的基因组约为12500核苷酸的正链RN...

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【部分图文】：

图1-1BVDV基因组结构示意图（未按正常比例）

图1-1BVDV基因组结构示意图（未按正常比例）2.2BVDV-NS5B基因和功能BVDV基因组RNA编码约3900个氨基酸。从ORF翻译聚蛋白随后通过病毒编码或细胞蛋白酶加工成12种单个蛋白质，其中NS5B位于多蛋白的羧基末端，含有经典氨基酸基序....

图2-1表位阈值与抗原表位特异性的关系

本实验中所使用的仪器设备见附录1，所需的材料试剂见附录2，所需的试剂配方见附录3。2实验方法2.1NS5B基因抗原表位预测和设计从NCBI数据库中下载NS5B的序列，采用BepiPred和ABCpred联合在线预测B细胞表位。其网站分别是http:....

图2-3pET28a-NS5B重组质粒图谱

CAAATGGATACTGAAAAAAATACGCTTTCAGGGCAACCGGTGGTGGTGGCCGCAAAATAAAATATTATGAAACCGCGTGAAAAAGGCGGCGGCGGCGACACCCAGGTGACCAGTCGGCTACTATCGCAAAGAGTGGCACA....

图2-4重组质粒pET-28a-NS5B的鉴定结果

山东师范大学硕士学位论文将重组质粒pET-28a-NS5B进行双酶切处理，然后琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果显S5B基因和pET-28a表达载体的条带位置都正确354bp和5329bp（如图2-4）。电泳之后经过公司测序，结果完全正确。表明质粒构建成功，可以进行实验后....

本文编号：3904607