猴B病毒通用实时荧光定量PCR检测体系的建立与评价

发布时间：2024-02-22 06:09

　　猴B病毒(Monkey B virus,即Macacine alphaherpesvirus 1),是一种人畜共患病病原,其在自然宿主猕猴中多呈良性经过,而感染人后可引起脑脊髓炎甚至死亡,是目前确定的35种非人灵长类疱疹病毒中唯一一种已知对人有致病性的病毒,也是我国实验动物微生物学等级及监测国家标准中普通级实验用猴应排除的病原微生物。而目前现有的猴B病毒检测方法存在与人单纯疱疹病毒有交叉反应、步骤繁琐或无法同时检测猴B病毒所有基因型的问题,因此,亟需建立快速、特异、通用检测猴B病毒的方法,对于相关人员暴露后的快速诊断和治疗以及对建立高质量的实验猴群均具有重要意义。目的:建立能同时检测猴B病毒5种基因型的通用实时荧光定量PCR检测体系,并对其进行方法学评价。方法:首先,通过文献调研,确定猴B病毒的gB基因相对保守,从GenBank上下载猴B病毒5种基因型代表株的gB基因序列,使用DNAStar软件对这5种基因型代表毒株进行比对,确定猴B病毒各基因型gB基因的相对保守位置,再将这些保守位置序列与人单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)、人单纯...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1猴B病毒活化后48小时的超微结构.×54,000（RuebnerBH,etal.,1975）

引起人口腔溃疡的HSV-1和人生殖器疱疹的HS恒河猴中不表现疾病症状，Sabin等命名该病毒为病毒分类委员会（TheInternationalCommi据病毒的特征以及其与单纯疱疹病毒的交叉反应型（Cercopithecineherpesvirus1）[14]，2....

图1-3系统发育分析猴B病毒UL19和UL27（gB）蛋白核苷酸序列结果

图1-3系统发育分析猴B病毒UL19和UL27（gB）蛋白核苷酸序列结果Fig.1-3PhylogeneticAnalysisofMonkeyBVirusUL19andUL27(gB)ProteinNucleotideSequences注：先....

图2-1引物3F和3R进行PCR扩增产物Fig.2-1ThePCRamplificationofprimer3Fand3R

2-1引物3F和3R进行PCR扩增产-1ThePCRamplificationofprimer3FMarker；a~b：引物3F和3R扩增产r；a-b：Amplificationproductsofpri图2-2菌落PCR筛选重组质粒r....

图2-2菌落PCR筛选重组质粒Fig.2-2therecombinantplasmidverifiedbyPCRamplificationM：DL500DNAMarker；al：菌落PCR扩增片段；m：阴性对照

见图2-2，扩大培养正确的阳性克隆并提取质粒得到重组质粒插入片段的序列后，使用DNAStar软件与目全匹配，确定获得了准确的猴B病毒gB3重组质粒，见图重组gB3号参考品质粒。图2-1引物3F和3R进行PCR扩增产物Fig.2-1ThePCRa....

本文编号：3906515