FABP4转基因牛的生物学评价

发布时间：2024-02-23 13:38

　　牛肉脂肪含量是肉质风味的重要指标,我国牛肉消费以含有一定量脂肪的红肉为嗜好主流,因此急需培育出肉质好、产量高的优质肉牛品种。转基因技术是肉牛改良的重要手段之一,肌内脂肪是影响肉质的一个非常重要的因素,FABP4基因能影响肌内脂肪含量,促进脂肪沉积。本研究对获取的转基因牛进行生物学评价,包括对转基因阳性、基因拷贝数、基因表达水平、蛋白表达水平进行检测,旨在为转基因优良新品种的进一步研究提供理论依据。本研究所得结果如下； 1、对通过真核表达载体的构建、细胞转染、体细胞核移植、胚胎移植等技术手段成功获得的3头克隆牛进行PCR检测发现均为转基因阳性；经血液、尿液生化分析,表明转基因个体身体状况良好,脂肪代谢水平有所增强。 2、利用Southern blot方法检测了3头转基因个体外源FABP4基因的拷贝数,结果表明3头转基因牛的外源基因均为单拷贝插入。 3、对于整合位点及侧翼序列的检测,1号转基因牛外源基因整合位点在13号染色体,侧翼序列大小为736bp；2号个体外源基因整合位点在24号染色体,侧翼序列大小为494bp；3号个体外源基因整合位点在10号染色体,侧翼序列大小为771bp。 4、在...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 转基因动物的研究进展
        1.2.1 转基因动物的应用
        1.2.2 转基因动物的安全问题
    1.3 体细胞核移植技术的研究进展
        1.3.1 体细胞核移植技术与转基因技术的结合
        1.3.2 影响体细胞核移植的因素
    1.4 FABP4基因功能及研究进展
        1.4.1 FABP4基因的生物学功能
        1.4.2 FABP4基因的研究进展
    1.5 研究的目的及意义
第二章 FABP4转基因牛的阳性鉴定及生化指标检测
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 样品采集
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 试验所需试剂配制
        2.1.5 主要仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 组织、血液总RNA的提取
        2.2.2 RT-PCR检测
        2.2.3 血液生化分析
        2.2.4 尿液生化分析
    2.3 结果
        2.3.1 个体阳性检测
        2.3.2 转基因个体身体成分检测
    2.4 讨论
        2.4.1 影响细胞转染的因素
        2.4.2 绿色荧光蛋白在转基因动物上的应用
        2.4.3 转基因动物安全性的分析
    2.5 小结
第三章 FABP4转基因牛外源基因拷贝数及整合位点的测定
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 试验所需试剂的配制
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 基因组DNA的提取
        3.2.2 Southern blot杂交
        3.2.3 TAIL-PCR检测整合位点
    3.3 结果
        3.3.1 Southern blot的鉴定结果
        3.3.2 整合位点检测结果
    3.4 讨论
        3.4.1 Southernblot技术的研究进展
        3.4.2 外源基因拷贝数对转基因动物的影响
        3.4.3 TAIL-PCR技术的研究进展
        3.4.4 整合位点对转基因动物的影响
    3.5 小结
第四章 转基因牛FABP4基因及蛋白的表达水平检测
    4.1 材料
        4.1.1 试验动物及样品采集
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 试验所需试剂的配置
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 荧光定量PCR试验
        4.2.2 Western blot检测
    4.3 结果
        4.3.1 转基因牛与野生型牛外源FABP4基因的表达水平
        4.3.2 转基因牛外源FABP4基因的相对表达水平变化
        4.3.3 转基因与野生型牛内源FABP4基因及整体FABP4基因表达水平变化
        4.3.4 转基因牛FABP4基因的蛋白表达水平
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 全文结论
    5.1 结论
    5.2 创新点
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3907573