调控IFN-γ的microRNA筛选及作用机制研究
发布时间：2024-02-25 18:18
免疫系统是生物体抵抗外来微生物入侵的第一道防线,干扰素是免疫应答过程中的重要效应因子。Interferon-γ(IFN-y)属于Ⅱ型干扰素,主要由活化的T淋巴细胞、NK细胞产生,在天然免疫和获得性免疫中发挥重要作用,特别是对胞内寄生菌的感染具有显著抑制效果。microRNA(miRNA)是一类广泛存在于生物体内且长度在18-25bp之间的非编码RNA。近十年来,大量研究表明miRNA参与对机体免疫系统的调控,对维持机体的免疫稳态起着举足轻重的作用。本研究选取重要的免疫细胞因子IFN-y作为研究对象,利用生物信息学方法和生物学实验,对可能参与调控IFN-y表达的miRNA进行了筛选和验证,希望通过本研究能够系统阐述miRNA对IFN-y表达多层次的调控机制,加深对miRNA调控IFN-y介导的免疫应答过程中作用机制的认识,同时为进一步开发miRNA作为疾病诊断和治疗的新靶标提供理论依据。具体研究内容包括以下几个方面： 1.靶向IFN-y启动子及其3’UTR的miRNA的预测 利用在线miRNA预测软件Microinspector和TargetScan分别对IFN-y转录起始位点上游的11...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第1章 文献综述
1.1 干扰素
1.1.1 IF-N-γ的产生
1.1.2 IFN-γ的分子结构与生物学功能
1.1.3 IFN-γ的应用及发展前景
1.2 microRNA
1.2.1 microRNA的生成
1.2.2 microRNA的作用方式
1.2.3 microRNA的表达调控
1.2.4 microRNA的研究方法
1.2.5 microRNA的应用前景
第2章 目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 细胞系以及转染相关材料
3.1.3 载体构建所用材料及获赠载体
3.1.4 培养基及其配制
3.1.5 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 靶点突变报告质粒的构建
3.2.3 双荧光素酶报告系统
3.2.4 miRNA mimics、inhibitors及超表达质粒的电转
3.2.5 Real-Time PCR检测IFN-γmRNA表达水平
3.2.6 ELISA检测IFN-γ蛋白表达水平
3.2.7 荧光定量qRT-PCR检测miRNA表达差异
3.2.8 统计学方法
第4章 结果与分析
4.1 IFN-γ启动子及3’UTR报告质粒的构建
4.1.1 IFN-γ启动子报告质粒的构建
4.1.2 IFN-γ 3’UTR报告质粒的构建
4.2 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA预测
4.3 靶向IFN-γ启动子的miRNA筛选
4.3.1 IFN-γ转录起始位点上游1197bp片段启动子活性的验证
4.3.2 靶向IFN-γ启动子的miRNA的初步筛选
4.3.3 miR-27a抑制IFN-γ启动子活性的验证
4.3.4 miR-27a与IFN-γ启动子作用靶点的验证
4.4 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA筛选
4.4.1 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA的初步筛选
4.4.2 miR-27a结合IFN-γ3’UTR的验证
4.4.3 miR-27a与IFN-γ3’UTR作用靶点的验证
4.5 T细胞中miR-27a对IFN-γ表达的调控作用
4.5.1 EL4细胞电转条件的优化
4.5.2 EL4细胞中IFN-γ表达的检测
4.5.3 EL4细胞中miR-27a对IFN-γ表达的调控作用
4.5.4 EL4细胞中T-bet表达质粒表达效率的检测
4.6 EL4细胞中IFN-γ的表达对miR-27a表达的影响
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA的预测
5.1.2 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA的筛选与验证
5.1.3 miR-27a抑制IFN-γ表达
5.1.4 表达量增加的IFN-γ对miR-27a表达的影响
5.2 结论
参考文献
致谢
本文编号：3910703
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第1章 文献综述
1.1 干扰素
1.1.1 IF-N-γ的产生
1.1.2 IFN-γ的分子结构与生物学功能
1.1.3 IFN-γ的应用及发展前景
1.2 microRNA
1.2.1 microRNA的生成
1.2.2 microRNA的作用方式
1.2.3 microRNA的表达调控
1.2.4 microRNA的研究方法
1.2.5 microRNA的应用前景
第2章 目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 细胞系以及转染相关材料
3.1.3 载体构建所用材料及获赠载体
3.1.4 培养基及其配制
3.1.5 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 靶点突变报告质粒的构建
3.2.3 双荧光素酶报告系统
3.2.4 miRNA mimics、inhibitors及超表达质粒的电转
3.2.5 Real-Time PCR检测IFN-γmRNA表达水平
3.2.6 ELISA检测IFN-γ蛋白表达水平
3.2.7 荧光定量qRT-PCR检测miRNA表达差异
3.2.8 统计学方法
第4章 结果与分析
4.1 IFN-γ启动子及3’UTR报告质粒的构建
4.1.1 IFN-γ启动子报告质粒的构建
4.1.2 IFN-γ 3’UTR报告质粒的构建
4.2 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA预测
4.3 靶向IFN-γ启动子的miRNA筛选
4.3.1 IFN-γ转录起始位点上游1197bp片段启动子活性的验证
4.3.2 靶向IFN-γ启动子的miRNA的初步筛选
4.3.3 miR-27a抑制IFN-γ启动子活性的验证
4.3.4 miR-27a与IFN-γ启动子作用靶点的验证
4.4 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA筛选
4.4.1 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA的初步筛选
4.4.2 miR-27a结合IFN-γ3’UTR的验证
4.4.3 miR-27a与IFN-γ3’UTR作用靶点的验证
4.5 T细胞中miR-27a对IFN-γ表达的调控作用
4.5.1 EL4细胞电转条件的优化
4.5.2 EL4细胞中IFN-γ表达的检测
4.5.3 EL4细胞中miR-27a对IFN-γ表达的调控作用
4.5.4 EL4细胞中T-bet表达质粒表达效率的检测
4.6 EL4细胞中IFN-γ的表达对miR-27a表达的影响
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA的预测
5.1.2 靶向IFN-γ启动子及靶向其3’UTR的miRNA的筛选与验证
5.1.3 miR-27a抑制IFN-γ表达
5.1.4 表达量增加的IFN-γ对miR-27a表达的影响
5.2 结论
参考文献
致谢
本文编号：3910703
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3910703.html
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