猪瘟病毒抗体胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制及初步应用

发布时间：2024-03-08 18:52

　　猪瘟(classical swine fever, CSF)是猪的一种高度接触性烈性传染病,被认为是严重危害和制约我国养猪业发展的重要传染病。尽管我国早在1956年就研制出了世界上最有效的猪瘟兔化弱毒疫苗,成功控制了猪瘟在我国的大规模爆发,但其一直没有得到根除。近年来,猪瘟在我国的流行呈现非典型性、慢性、持续性感染和隐性感染等新特点,免疫猪群发生猪瘟的情况越来越多,这些对猪瘟的预防和控制提出了新的挑战。 我国现阶段主要采用ELISA方法对免疫猪群进行抗体水平的监测,该方法需要几小时才能完成,且要求有熟练的实验操作人员和特殊的仪器,不能满足临床实践中对抗体水平监测,快速、可靠、廉价的需求。因此,建立猪瘟病毒抗体的快速检测方法具有非常重要的意义。现有研究表明,猪瘟病毒的E2囊膜糖蛋白能刺激动物机体产生中和抗体,是CSFV最重要的保护性抗原,可用于建立猪瘟血清学检测方法。 本研究利用原核表达的猪瘟E2融合蛋白,建立了检测猪瘟病毒抗体的双抗原夹心胶体金免疫层析方法,制备了快速检测试纸条,取得了如下研究结果： 根据GenBank上发表的猪瘟病毒E2蛋白的基因序列,设计引物扩增去除信号肽和跨膜区的...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一篇 文献综述
    1 概述
    2 猪瘟的流行和分布
    3 猪瘟病毒的病原学特性
        3.1 病原学
        3.2 猪瘟病毒的基因结构
        3.3 猪瘟病毒的结构蛋白及其功能
    4 实验室四种常规诊断技术
        4.1 病毒分离鉴定
        4.2 荧光抗体法
        4.3 反转录-聚合酶链反应
        4.4 酶联免疫吸附试验
    5 胶体金免疫层析技术
        5.1 胶体金免疫层析技术研究进展
        5.2 胶体金的特性
        5.3 胶体金的制备
        5.4 免疫胶体金的制备、纯化及保存
        5.5 胶体金免疫层析技术原理
        5.6 胶体金免疫层析技术在兽医领域的应用
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因在大肠杆菌的高效表达及表达产物的纯化制备
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 目的基因的扩增
            1.3 质粒pET-32a(+)的提取及双酶切
            1.4 原核表达载体pET-32a-E2的构建
            1.5 重组质粒的诱导表达
            1.6 SDS-PAGE检测表达产物
            1.7 目的蛋白的纯化
            1.8 Western Blot检测蛋白的免疫学活性
            1.9 兔抗E2蛋白多克隆抗体的制备和纯化
        2 结果
            2.1 原核表达载体E2-pET32a的构建
            2.2 SDS-PAGE检测表达产物
            2.3 蛋白的纯化与免疫学活性鉴定
            2.4 兔抗E2蛋白多克隆抗体的制备
        3 讨论
    第二章 猪瘟抗体试纸条检测方法的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 胶体金的制备
            1.3 胶体金的质量鉴定
            1.4 金标抗原的制备
            1.5 试纸条各种条件的优化
            1.6 猪瘟抗体免疫层析快速检测试纸条的研制
            1.7 试纸条性能的测定
            1.8 临床应用试验
        2 结果
            2.1 胶体金的制备及质量鉴定
            2.2 胶体金最佳标记条件的确定
            2.3 试纸条各种条件的优化
            2.4 试纸条性能的测定
            2.5 临床应用试验
        3 讨论
            3.1 胶体金免疫层析法检测模式的选择
            3.2 影响胶体金制备的因素
            3.3 试纸条的性能
            3.4 胶体金免疫层析技术的优势
参考文献
全文总结
附录
致谢



本文编号：3922238