小反刍兽疫病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究
发布时间：2024-03-16 02:16
小反刍兽疫(Peste des petits ruminants, PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)引起的一种高度接触性传染的病毒性疾病,主要感染小反刍动物,对畜牧业带来严重的经济危害,是世界动物卫生组织(ore)规定必须上报的疫病。目前主要依靠弱毒疫苗进行预防,但该类疫苗难以利用血清学方法区分疫苗免疫和野毒感染动物,不利于该病的控制和消灭,而且弱毒疫苗还存在着毒力返强的安全隐患。因此,研发安全、有效的新型疫苗尤为重要。病毒样颗粒由于在结构上与天然病毒相似,并且不含核酸,从而具有很好的免疫原性和安全性,作为新型亚单位疫苗在人类和动物疫苗领域得到广泛研究。本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统构建了表达PPRV H或F蛋白的病毒样颗粒,并在小鼠和山羊上进行了免疫原性的初步研究。由于杆状病毒-昆虫细胞表达系统可以对表达的外源蛋白进行转录后加工和多种修饰,表达的蛋白质具有与天然蛋白质相似的生物学活性,基于以上优点,该系统特别适合有囊膜病毒VLP的制备。本实验构建了同时表达小反刍兽疫病毒的M、N、H和F蛋白的重组杆状病毒和...
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 小反刍兽疫病毒的研究现状
1.1.1 PPR的致病性和地理分布
1.1.2 PPRV基因组结构和生物学特性
1.1.3 PPRV感染的诊断方法
1.1.4 PPRV疫苗的研究
1.2 病毒样颗粒的研究进展
1.2.1 VLP的表达系统
1.2.2 VLP在基础研究中的应用
1.2.3 VLP在疫苗研究中的应用
1.3 副黏病毒出芽机制研究进展
1.3.1 M蛋白在副黏病毒颗粒组装中的中心作用
1.3.2 糖蛋白在副黏病毒颗粒组装中的作用
1.3.3 N蛋白在副黏病毒颗粒组装中的作用
1.4 研究目的和意义
第二章 PPRV病毒样颗粒的制备
摘要
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 PPRV的繁殖和病毒滴度的测定
2.1.3 PPRV结构基因的RT-PCR扩增
2.1.4 PPRV结构基因的克隆与鉴定
2.1.5 重组供体质粒的构建及鉴定
2.1.6 重组穿梭质粒的构建
2.1.7 重组穿梭质粒的提取
2.1.8 重组穿梭质粒的鉴定
2.1.9 重组杆状病毒的制备和滴定
2.1.10 重组蛋白在昆虫细胞中表达的检测
2.1.11 PPRV结构蛋白的大量表达和蔗糖密度梯度离心纯化
2.1.12 PPRV病毒样颗粒的特性鉴定
2.2 结果
2.2.1 PPRV滴度
2.2.2 重组供体质粒的构建与鉴定
2.2.3 重组穿梭质粒的构建与鉴定
2.2.4 重组杆状病毒滴度
2.2.5 重组蛋白表达的检测
2.2.6 透射电镜
2.3 讨论
第三章 PPRV病毒样颗粒对小鼠和山羊的免疫原性研究
摘要
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 免疫用抗原的准备
3.1.3 实验动物免疫和样品采集
3.1.4 PPRV特异性抗体检测
3.1.5 基于PPRV N单抗的竞争ELISA检测
3.1.6 血清中和抗体检测
3.1.7 淋巴细胞增殖实验
3.1.8 小鼠IFN-γ的ELISPOT分析
3.2 结果
3.2.1 PPRV VLPs的制备和鉴定
3.2.2 免疫小鼠PPRV特异性抗体检测
3.2.3 免疫小鼠PPRV中和抗体检测
3.2.4 免疫小鼠淋巴细胞增殖反应
3.2.5 免疫小鼠IFN-γ ELISPOT结果
3.2.6 免疫山羊PPRV特异性抗体检测结果
3.2.7 免疫山羊PPRV特异性中和抗体结果
3.2.8 免疫山羊淋巴细胞增殖反应
3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3928964
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 小反刍兽疫病毒的研究现状
1.1.1 PPR的致病性和地理分布
1.1.2 PPRV基因组结构和生物学特性
1.1.3 PPRV感染的诊断方法
1.1.4 PPRV疫苗的研究
1.2 病毒样颗粒的研究进展
1.2.1 VLP的表达系统
1.2.2 VLP在基础研究中的应用
1.2.3 VLP在疫苗研究中的应用
1.3 副黏病毒出芽机制研究进展
1.3.1 M蛋白在副黏病毒颗粒组装中的中心作用
1.3.2 糖蛋白在副黏病毒颗粒组装中的作用
1.3.3 N蛋白在副黏病毒颗粒组装中的作用
1.4 研究目的和意义
第二章 PPRV病毒样颗粒的制备
摘要
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 PPRV的繁殖和病毒滴度的测定
2.1.3 PPRV结构基因的RT-PCR扩增
2.1.4 PPRV结构基因的克隆与鉴定
2.1.5 重组供体质粒的构建及鉴定
2.1.6 重组穿梭质粒的构建
2.1.7 重组穿梭质粒的提取
2.1.8 重组穿梭质粒的鉴定
2.1.9 重组杆状病毒的制备和滴定
2.1.10 重组蛋白在昆虫细胞中表达的检测
2.1.11 PPRV结构蛋白的大量表达和蔗糖密度梯度离心纯化
2.1.12 PPRV病毒样颗粒的特性鉴定
2.2 结果
2.2.1 PPRV滴度
2.2.2 重组供体质粒的构建与鉴定
2.2.3 重组穿梭质粒的构建与鉴定
2.2.4 重组杆状病毒滴度
2.2.5 重组蛋白表达的检测
2.2.6 透射电镜
2.3 讨论
第三章 PPRV病毒样颗粒对小鼠和山羊的免疫原性研究
摘要
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 免疫用抗原的准备
3.1.3 实验动物免疫和样品采集
3.1.4 PPRV特异性抗体检测
3.1.5 基于PPRV N单抗的竞争ELISA检测
3.1.6 血清中和抗体检测
3.1.7 淋巴细胞增殖实验
3.1.8 小鼠IFN-γ的ELISPOT分析
3.2 结果
3.2.1 PPRV VLPs的制备和鉴定
3.2.2 免疫小鼠PPRV特异性抗体检测
3.2.3 免疫小鼠PPRV中和抗体检测
3.2.4 免疫小鼠淋巴细胞增殖反应
3.2.5 免疫小鼠IFN-γ ELISPOT结果
3.2.6 免疫山羊PPRV特异性抗体检测结果
3.2.7 免疫山羊PPRV特异性中和抗体结果
3.2.8 免疫山羊淋巴细胞增殖反应
3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3928964
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3928964.html