南江黄羊和波尔山羊骨骼肌卫星细胞增殖分化能力的比较
发布时间：2024-03-22 22:54
骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells, SMSCs)作为一种肌源性干细胞,对出生后骨骼肌的生长和肌肉受损后修复有重要作用。本试验以初生南江黄羊和波尔山羊背最长肌为材料,0.2%链酶蛋白酶消化后,采用Percoll液密度梯度离心法纯化并通过形态学和PAX-7免疫荧光染色鉴定收集到的SMSCs。通过血球计数板和CCK-8试剂盒检测比较南江黄羊和波尔山羊SMSCs 0-8 d9个阶段的增殖能力；HE染色比较3-8d的SMSCs融合率。此外,为了获得稳定的内参基因以定量目标基因的表达,利用qRT-PCR检测了9个内参基因(β-ACTIN, GAPDH, TOP2β、 YWHAZ, SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)在不同阶段(1d、3d、4d和7 d)SMSCs中表达量并运用geNorm软件筛选。我们进一步比较了SMSCs的标志基因PAX-7、MYOD、MYOG及p38MAPK信号通路中主要基因(TAK1、MKK3、MKK6、p38MAPK, MEF2A和MEF2C)在两个品种不同培养阶段SMSCs (1 d、3 d、4 d和7 d)的...
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 SMSCs概述
1.2 原代SMSCs的分离方法
1.3 SMSCs的纯化
1.4 SMSCs的鉴定
1.4.1 形态学鉴定
1.4.2 标志基因的鉴定
1.5 p38 MAPK信号通路的特征及功能
1.6 骨骼肌细胞中实时荧光定量PCR内参基因的筛选
1.7 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物及样品
2.1.2 主要耗材及常规器皿
2.1.3 主要试剂及配制
2.2 试验方法
2.2.1 山羊SMSCs的分离
2.2.2 山羊SMSCs的纯化
2.2.3 山羊SMSCs的鉴定
2.2.3.1 SMSCs的形态学鉴定
2.2.3.2 SMSCs的免疫荧光染色
2.3 山羊SMSCs的冻存和复苏
2.3.1 SMSCs的冻存
2.3.2 SMSCs的复苏
2.4 山羊SMSCs的HE染色
2.5 山羊SMSCs增殖及融合率的检测
2.5.1 血球计数板统计SMSCs的数目
2.5.2 CCK-8试剂盒检测细胞的增殖
2.5.3 SMSCs融合率的评估
2.6 荧光定量PCR
2.6.1 SMSCs总RNA的提取及cDNA的合成
2.6.2 山羊SMSCs内参基因的筛选
2.6.3 山羊SMSCs中基因mRNA表达量的检测
2.6.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)反应
2.8 统计方法
3 结果与分析
3.1 山羊原代SMSCs的分离纯化
3.2 山羊SMSCs的鉴定
3.2.1 山羊SMSCs的形态学特征
3.2.2 山羊SMSCs的PAX-7免疫荧光染色鉴定
3.3 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖能力的比较
3.3.1 南江黄羊和波尔山羊SMSCs生长过程中细胞数目的比较
3.3.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs吸光度(OD值)的比较
3.4 南江黄羊和波尔山羊SMSCs融合率的比较
3.5 南江黄羊和波尔山羊SMSCs中各基因mRNA的表达
3.5.1 山羊SMSCs中内参基因的表达
3.5.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs标志基因的表达
3.5.3 p38MAPK信号通路基因在南江黄羊和波尔山羊SMSCs中的表达
3.5.4 p38MAPK信号通路基因在南江黄羊和波尔山羊SMSCs中表达量的比较
3.5.5 p38MAPK信号通路基因表达量的相关性分析
4 讨论
4.1 山羊高纯度SMSCs的获得
4.2 山羊SMSCs中稳定表达的内参基因
4.3 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖分化能力的差异
4.3.1 南江黄羊SMSCs更高的增殖和融合能力
4.3.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖和融合能力差异可能的分子机制
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
本文编号：3935071
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 SMSCs概述
1.2 原代SMSCs的分离方法
1.3 SMSCs的纯化
1.4 SMSCs的鉴定
1.4.1 形态学鉴定
1.4.2 标志基因的鉴定
1.5 p38 MAPK信号通路的特征及功能
1.6 骨骼肌细胞中实时荧光定量PCR内参基因的筛选
1.7 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物及样品
2.1.2 主要耗材及常规器皿
2.1.3 主要试剂及配制
2.2 试验方法
2.2.1 山羊SMSCs的分离
2.2.2 山羊SMSCs的纯化
2.2.3 山羊SMSCs的鉴定
2.2.3.1 SMSCs的形态学鉴定
2.2.3.2 SMSCs的免疫荧光染色
2.3 山羊SMSCs的冻存和复苏
2.3.1 SMSCs的冻存
2.3.2 SMSCs的复苏
2.4 山羊SMSCs的HE染色
2.5 山羊SMSCs增殖及融合率的检测
2.5.1 血球计数板统计SMSCs的数目
2.5.2 CCK-8试剂盒检测细胞的增殖
2.5.3 SMSCs融合率的评估
2.6 荧光定量PCR
2.6.1 SMSCs总RNA的提取及cDNA的合成
2.6.2 山羊SMSCs内参基因的筛选
2.6.3 山羊SMSCs中基因mRNA表达量的检测
2.6.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)反应
2.8 统计方法
3 结果与分析
3.1 山羊原代SMSCs的分离纯化
3.2 山羊SMSCs的鉴定
3.2.1 山羊SMSCs的形态学特征
3.2.2 山羊SMSCs的PAX-7免疫荧光染色鉴定
3.3 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖能力的比较
3.3.1 南江黄羊和波尔山羊SMSCs生长过程中细胞数目的比较
3.3.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs吸光度(OD值)的比较
3.4 南江黄羊和波尔山羊SMSCs融合率的比较
3.5 南江黄羊和波尔山羊SMSCs中各基因mRNA的表达
3.5.1 山羊SMSCs中内参基因的表达
3.5.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs标志基因的表达
3.5.3 p38MAPK信号通路基因在南江黄羊和波尔山羊SMSCs中的表达
3.5.4 p38MAPK信号通路基因在南江黄羊和波尔山羊SMSCs中表达量的比较
3.5.5 p38MAPK信号通路基因表达量的相关性分析
4 讨论
4.1 山羊高纯度SMSCs的获得
4.2 山羊SMSCs中稳定表达的内参基因
4.3 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖分化能力的差异
4.3.1 南江黄羊SMSCs更高的增殖和融合能力
4.3.2 南江黄羊和波尔山羊SMSCs增殖和融合能力差异可能的分子机制
5 结论
参考文献
致谢
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本文编号：3935071
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