DAZL基因启动子活性初步分析及其诱导剂的筛
发布时间：2024-03-24 19:57
DAZL (Deleted in Azoospermia-Like, DAZL)基因从生殖细胞发育早期开始表达,并在减数分裂过程中持续存在,是启动减数分裂的内因,在生殖细胞发育和分化过程中起关键调控作用。近年来,已有多篇关于DAZL基因在体外诱导胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程中起到重要作用的报道。但目前开展的ESCs诱导为生殖细胞的研究中,诱导剂众多,诱导效率不一,因此在体外条件下如何选择最适诱导剂或诱导剂组合以提高DAZL基因的表达量而诱导ESCs向雄性生殖细胞分化就显得尤为重要。本研究成功克隆了鸡和小鼠DAZL基因启动子,通过双荧光素酶报告基因检测系统确定了DAZL基因启动子的核心活性调控区,分析了DNA甲基化对DAZL基因启动子活性的影响,比较不同诱导剂对DAZL基因启动子的诱导效果并筛选出最适基因诱导剂及其组合。为研究在体外通过提高DAZL基因的表达而诱导ESCs向雄性生殖细胞分化提供参考。获得如下结果： 1.通过PCR方法首次克隆了苏禽黄鸡DAZL基因5’侧翼区的-93～-39bp片段序列,成功构建了真核表达载体pDAZL-...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号表
主要仪器
第一章 文献综述
1 胚胎干细胞体外诱导分化为生殖细胞的研究进展
1.1 胚胎干细胞
1.2 生殖细胞
1.3 胚胎干细胞向生殖细胞的诱导分化
1.3.1 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的方法
1.3.2 胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的诱导
1.3.3 胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导
1.3.4 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的应用前景
2 DAZL基因的研究进展
3 真核基因启动子与基因表达
3.1 真核生物启动子的结构
3.2 启动子与基因表达调控
3.3 启动子功能的验证方法
4 小鼠和鸡作为模式动物的特点
参考文献
第二章 鸡DAZL基因核心启动子的鉴定
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 苏禽黄鸡睾丸组织基因组DNA的提取
1.2.2 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建
1.2.3 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建
1.2.4 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析
1.2.5 DAZL基因核心启动子的鉴定
1.2.6 统计学处理
2 结果
2.1 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建
2.2 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建
2.3 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析
2.4 DAZL基因核心启动子的鉴定
2.4.1 鸡DAZL基因启动子不同长度缺失片段的PCR扩增
2.4.2 系列缺失载体的构建
2.4.3 鸡DAZL基因启动子核心区域鉴定
3 讨论
4 结论
参考文献
第三章 鸡DAZL基因DNA甲基化初步分析及诱导剂筛选
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响
1.2.2 睾丸组织提取液的制备
1.2.3 诱导剂处理转染后的细胞
1.2.4 双荧光素酶活性检测
1.2.5 统计学处理
2 结果
2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响
2.1.1 生物信息学预测DAZL基因启动子区域CpG岛
2.1.2 DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析
2.1.3 重亚硫酸盐测序
2.1.4 DNA甲基化对鸡DAZL基因启动子活性的影响
2.2 鸡DAZL基因启动子诱导剂筛选
3 讨论
4 结论
参考文献
第四章 DAZL基因启动子诱导剂的通用性验证
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
1.2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定
1.2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析
1.2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证
2 结果
2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
2.1.1 真核表达载体pmDAZL-EGFP的构建
2.1.2 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定
2.2.1 DAZL基因启动子5′端不同长度缺失片段的PCR扩增
2.2.2 系列缺失载体的构建
2.2.3 小鼠DAZL基因启动子活性检测
2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析
2.3.1 小鼠DAZL基因启动子CpG岛区域预测
2.3.2 小鼠DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析
2.3.3 重亚硫酸盐测序
2.3.4 DNA甲基化对小鼠DAZL基因启动子活性的影响
2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证
3 讨论
4 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文
本文编号：3937931
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号表
主要仪器
第一章 文献综述
1 胚胎干细胞体外诱导分化为生殖细胞的研究进展
1.1 胚胎干细胞
1.2 生殖细胞
1.3 胚胎干细胞向生殖细胞的诱导分化
1.3.1 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的方法
1.3.2 胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的诱导
1.3.3 胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导
1.3.4 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的应用前景
2 DAZL基因的研究进展
3 真核基因启动子与基因表达
3.1 真核生物启动子的结构
3.2 启动子与基因表达调控
3.3 启动子功能的验证方法
4 小鼠和鸡作为模式动物的特点
参考文献
第二章 鸡DAZL基因核心启动子的鉴定
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 苏禽黄鸡睾丸组织基因组DNA的提取
1.2.2 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建
1.2.3 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建
1.2.4 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析
1.2.5 DAZL基因核心启动子的鉴定
1.2.6 统计学处理
2 结果
2.1 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建
2.2 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建
2.3 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析
2.4 DAZL基因核心启动子的鉴定
2.4.1 鸡DAZL基因启动子不同长度缺失片段的PCR扩增
2.4.2 系列缺失载体的构建
2.4.3 鸡DAZL基因启动子核心区域鉴定
3 讨论
4 结论
参考文献
第三章 鸡DAZL基因DNA甲基化初步分析及诱导剂筛选
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响
1.2.2 睾丸组织提取液的制备
1.2.3 诱导剂处理转染后的细胞
1.2.4 双荧光素酶活性检测
1.2.5 统计学处理
2 结果
2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响
2.1.1 生物信息学预测DAZL基因启动子区域CpG岛
2.1.2 DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析
2.1.3 重亚硫酸盐测序
2.1.4 DNA甲基化对鸡DAZL基因启动子活性的影响
2.2 鸡DAZL基因启动子诱导剂筛选
3 讨论
4 结论
参考文献
第四章 DAZL基因启动子诱导剂的通用性验证
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 实验材料
1.1.2 实验试剂
1.1.3 引物设计与合成
1.1.4 常用试剂配制
1.2 方法
1.2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
1.2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定
1.2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析
1.2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证
2 结果
2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
2.1.1 真核表达载体pmDAZL-EGFP的构建
2.1.2 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析
2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定
2.2.1 DAZL基因启动子5′端不同长度缺失片段的PCR扩增
2.2.2 系列缺失载体的构建
2.2.3 小鼠DAZL基因启动子活性检测
2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析
2.3.1 小鼠DAZL基因启动子CpG岛区域预测
2.3.2 小鼠DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析
2.3.3 重亚硫酸盐测序
2.3.4 DNA甲基化对小鼠DAZL基因启动子活性的影响
2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证
3 讨论
4 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文
本文编号：3937931
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3937931.html