PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的构建及检测技术研究
发布时间：2024-03-29 22:21
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)以及猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis of pig,TGEV)是国内规模化养猪业中引起仔猪腹泻的最常见的病毒性病原,在实际养猪生产中给哺乳仔猪带来极大的危害,以及较高的致死率。临床上急需要一种有效地能够同时鉴别诊断三种病毒性病原的检测方法。本研究首次构建了可同时检测PEDV、TGEV和PoRV的诊断基因芯片,主要研究内容包括下面三个方面：1.探针基因的克隆、鉴定与序列分析本研究设计并合成了PEDV、TGEV与PoRV的6对特异性引物,然后,采用PCR方法扩增并得到了6种特异性的探针基因片段PEDV-PM (421bp), PEDV-PS (474bp), TGEV-TN (362bp), TGEV-TS (276bp), PORV-NSP4 (270bp), PoRV-VP7 (381bp),分别克隆于PMD-19T载体,并对其进行测序鉴定,结果表明：连接与载体的DNA片段为本研究所需的目的...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩写说明
文献综述
1 猪传染性胃肠炎诊断技术研究进展
1.1 血清学诊断技术
1.2 分子生物学检测技术
2 流行性腹泻诊断技术的研究进展
2.1 免疫血清学诊断方法
2.2 分子生物学检测技术
3 轮状病毒诊断技术研究进展
3.1 经典病原检测技术
3.2 免疫学检测技术
3.3 分子生物学检测技术
4 基因芯片及在疾病检测中的应用
4.1. 基因芯片概述
4.2 基因芯片制备的基本流程
4.3 基因芯片在疾病检测中的应用
5 研究目的及意义
第一章 TGEV、PEDV和PoRV探针的克隆与分析
1 材料
1.1 菌种与病毒
1.2 载体与菌株
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 引物设计
2.2 PEDV探针基因的制备
2.3 TGEV、PoRV重组质粒菌的鉴定及探针的制备
2.4 重组质粒的PCR鉴定
2.5 核苷酸序列测定和同源性分析
3 结果与分析
3.1 PEDV的PM和PS探针基因扩增结果
3.2 TGEV和PoRV探针基因的PCR扩增结果
3.3 重组质粒PCR鉴定结果及基因序列分析
4 讨论
4.1 探针基因的选择
4.2 引物的设计
4.3 探针基因的PCR扩增、克隆与鉴定
4.4 探针基因的DNA序列分析
5 小结
第二章 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的构建
1 材料
1.1 探针基因重组质粒
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 探针及定位基因的制备
2.2 基因芯片的制备
2.3 靶基因的制备
2.4 基因芯片检测的操作程序
3 结果与分析
3.1 探针及定位基因的不同纯化方法的选择比较结果
3.2 探针基因纯化及浓度测定
4 讨论
4.1 基因芯片载体的选择
4.2 基因芯片检测技术的特点
4.3 探针的制备
4.4 靶基因的标记
4.5 基因芯片杂交结果判定
5 小结
第三章 PEDV-TGEV-PoRV检测基因芯片的应用研究
1 材料
1.1 探针基因重组质粒
1.2 毒株
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 靶基因的多重标记体系的建立
2.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性试验
2.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的灵敏性试验
2.4 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的重复使用试验
2.5 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片保存期试验
3 结果与分析
3.1 探针基因多重PCR标记条件优化结果
3.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性试验
3.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的敏感性试验
3.4 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片重复性试验结果
3.5 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的保存期试验结果
4 讨论
4.1 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性
4.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的敏感性
4.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的重复利用
5 小结
第四章 结论
参考文献
致谢
附录一：探针基因的测序结果
附录二：试剂的配置方法
本文编号：3941390
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩写说明
文献综述
1 猪传染性胃肠炎诊断技术研究进展
1.1 血清学诊断技术
1.2 分子生物学检测技术
2 流行性腹泻诊断技术的研究进展
2.1 免疫血清学诊断方法
2.2 分子生物学检测技术
3 轮状病毒诊断技术研究进展
3.1 经典病原检测技术
3.2 免疫学检测技术
3.3 分子生物学检测技术
4 基因芯片及在疾病检测中的应用
4.1. 基因芯片概述
4.2 基因芯片制备的基本流程
4.3 基因芯片在疾病检测中的应用
5 研究目的及意义
第一章 TGEV、PEDV和PoRV探针的克隆与分析
1 材料
1.1 菌种与病毒
1.2 载体与菌株
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 引物设计
2.2 PEDV探针基因的制备
2.3 TGEV、PoRV重组质粒菌的鉴定及探针的制备
2.4 重组质粒的PCR鉴定
2.5 核苷酸序列测定和同源性分析
3 结果与分析
3.1 PEDV的PM和PS探针基因扩增结果
3.2 TGEV和PoRV探针基因的PCR扩增结果
3.3 重组质粒PCR鉴定结果及基因序列分析
4 讨论
4.1 探针基因的选择
4.2 引物的设计
4.3 探针基因的PCR扩增、克隆与鉴定
4.4 探针基因的DNA序列分析
5 小结
第二章 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的构建
1 材料
1.1 探针基因重组质粒
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 探针及定位基因的制备
2.2 基因芯片的制备
2.3 靶基因的制备
2.4 基因芯片检测的操作程序
3 结果与分析
3.1 探针及定位基因的不同纯化方法的选择比较结果
3.2 探针基因纯化及浓度测定
4 讨论
4.1 基因芯片载体的选择
4.2 基因芯片检测技术的特点
4.3 探针的制备
4.4 靶基因的标记
4.5 基因芯片杂交结果判定
5 小结
第三章 PEDV-TGEV-PoRV检测基因芯片的应用研究
1 材料
1.1 探针基因重组质粒
1.2 毒株
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 靶基因的多重标记体系的建立
2.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性试验
2.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的灵敏性试验
2.4 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的重复使用试验
2.5 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片保存期试验
3 结果与分析
3.1 探针基因多重PCR标记条件优化结果
3.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性试验
3.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的敏感性试验
3.4 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片重复性试验结果
3.5 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的保存期试验结果
4 讨论
4.1 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的特异性
4.2 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的敏感性
4.3 PEDV-TGEV-PoRV诊断基因芯片的重复利用
5 小结
第四章 结论
参考文献
致谢
附录一：探针基因的测序结果
附录二：试剂的配置方法
本文编号：3941390
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3941390.html