p53在I型干扰素介导的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究

发布时间：2024-03-31 16:44

　　肿瘤抑制因子p53被称为“基因组卫士”，在细胞的DNA修复过程中发挥着极为重要的作用。同时p53在细胞中具有诱导细胞凋亡、参与细胞周期捕获、参与细胞代谢和抗病毒等功能。流感病毒感染细胞后，p53的表达量得以累积，IRF9的表达也明显上升。流感病毒感染p53敲除型小鼠与p53野生型小鼠后，p53敲除型小鼠的临床症状、肺脏的病理变化及流感病毒滴度均要严重于p53野生型小鼠。这表明p53与宿主抗流感病毒反应具有着密切的关系。 本研究首先利用流感病毒感染p53正常及p53下调表达的A549细胞，对细胞中病毒的复制水平和病毒滴度差异进行比较，了解清楚p53是否直接参与细胞抑制流感病毒复制的过程。同时检测Ⅰ型干扰素信号通路中多个抗病毒基因的表达差异，间接反映流感病毒感染后，p53对Ⅰ型干扰素信号通路的影响。结果表明，流感病毒感染后，p53直接影响着Ⅰ型干扰素信号通路中多个抗病毒相关基因的表达；下调p53表达后，IRF9、IRF7、RIG-I、ISG20、ISG15、GBP1和OAS1等多个基因的mRNA表达量均显著下降。Ⅰ型干扰素通路在机体抗流感过程中发挥着非常重要的作用。这表明流感病毒感染后，p...

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1. 流感病毒
        1.1.1 概述
        1.1.2 流感病毒的分子结构及致病基础
        1.1.3 流感病毒的复制周期
        1.1.4 流感病毒疫苗进展
    1.2. 肿瘤抑制因子 p53
        1.2.1 p53 的曲折认知路
        1.2.2 p53 的分子生物学特性与功能
        1.2.3 p53 与先天性免疫及获得性免疫的关系
        1.2.4 p53 抗病毒研究进展
        1.2.5 p53 与Ⅰ型干扰素之间的关系
    1.3. 干扰素诱导蛋白 GBP1
        1.3.1 hGBP1 的分子结构与生物学活性
        1.3.2 hGBP1 抗病毒及多类病原微生物的能力
        1.3.3 hGBP1 内皮细胞相关的作用
        1.3.4 hGBP1 的抗癌功能
        1.3.5 hGBP1 的其他特性
    1.4. 本研究的目的及意义
第二章 流感病毒感染过程中 p53 对干扰素信号通路的影响
    2.1. 前言
    2.2. 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3. 结果
        2.3.1 siRNA 干扰效率摸索
        2.3.2 流感病毒感染不影响 p53 mRNA 的表达量
        2.3.3 流感病毒感染后，p53 在Ⅰ型干扰素信号通路的活化过程中发挥着重要作用
        2.3.4 下调 p53 表达显著加快流感病毒在细胞内的复制水平
    2.4. 讨论
第三章 p53 促进Ⅰ型干扰素通路活化的研究
    3.1. 前言
    3.2. 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3. 结果
        3.3.1 p53 蛋白可以促进干扰素诱导的干扰素刺激应答元件（IFN-stimulated response element, ISRE）的激活
        3.3.2 干扰素可以诱导 p53 mRNA 上调表达
        3.3.3 下调 p53 表达显著减弱干扰素对多个 ISGs 的诱导能力
        3.3.4 p53 在干扰素发挥的抗流感病毒过程中具有重要作用
    3.4. 讨论
第四章 干扰素刺激基因 hGBP1 抗流感病毒作用及其病毒逃逸机制解析
    4.1. 前言
    4.2. 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果
        4.3.1 流感病毒感染，hGBP1 表达显著上升
        4.3.2 hGBP1 过表达可以抑制流感病毒的复制
        4.3.3 hGBP1 K51A 过表达不能抑制流感病毒的复制
        4.3.4 流感病毒 NS1 能够与 hGBP1 结合
        4.3.5 hGBP1 第 51 位赖氨酸是其与 NS1 结合所必须的
        4.3.6 NS1123-144 位氨基酸序列是 NS1 与 hGBP1 结合所必需的
        4.3.7 NS1 可以抑制 hGBP1 的 GTPase 活性
        4.3.8 NS1 拮抗 hGBP1 介导的抗病毒能力
    4.4. 讨论
第五章 p53 直接转录调控抗流感分子 hGBP1 表达
    5.1. 前言
    5.2. 材料与方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3. 结果
        5.3.1 CHIP-on-Chip 方法寻找 p53 调控的靶基因
        5.3.2 hGBP1 为潜在的 p53 转录激活靶基因
        5.3.3 p53 转录激活 hGBP1 启动子序列
        5.3.4 hGBP1 启动子序列 p53 RE2 与 p53 RE3 基序为 p53 结合靶位点
        5.3.5 流感病毒感染或干扰素刺激后，p53 对 hGBP1 的正常表达具有不可缺少的作用
    5.4. 讨论
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3944219