CRISPR/Cas9技术在构建弓形虫微线体蛋白MIC3敲除株上的应用

发布时间：2024-03-31 22:58

　　刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的重要工具,本研究利用CRISPR/Cas9技术对弓形虫Ⅰ型虫株RH和Ⅱ型虫株PRU的微线体蛋白mic3基因进行敲除。通过单克隆的筛选和鉴定,成功获得了2种虫株的mic3敲除株。之后对RH敲除株进行研究,发现mic3缺失可以轻微提高虫体在体外培养时的生长速度以及对小鼠的毒力。本研究不仅说明了CRISPR/Cas9技术可以应用到弓形虫的基因敲除和改造上,并且不受弓形虫虫株的限制,同时也为进一步研究mic3在虫体中的功能奠定基础。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫株与细胞
    1.2 培养基与试剂
    1.3 弓形虫的培养
    1.4 敲除质粒和同源模板质粒的构建
    1.5 弓形虫的转染
    1.6 阳性克隆的筛选
    1.7 阳性克隆的鉴定
    1.8 空斑试验
    1.9 小鼠毒力试验
2 结果
    2.1 mic3基因靶点的选择和敲除质粒的构建
    2.2 弓形虫RH株和PRU株mic3基因敲除株的筛选和鉴定
    2.3 mic3敲除株稳定性的检测
    2.4 RH△MIC3敲除株的表型研究
3 讨论



本文编号：3944621