牛IRX3基因启动子转录调控分析

发布时间：2024-05-18 11:27

　　旨在探究牛IRX3基因组织表达规律,并鉴定其启动子区关键转录因子,以期阐明其转录调控机制。本研究采集3头成年公牛心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪、背最长肌、大肠、小肠、网胃、瘤胃、皱胃及睾丸组织,利用荧光定量PCR检测IRX3基因在不同组织中相对表达量。同时克隆牛IRX3基因1.8 kb启动子区序列并构建其启动子6个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体,分别转染3T3-L1和C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子,借助定点突变及siRNA干扰技术在3T3-L1细胞系内初步鉴定关键转录因子对IRX3基因的转录调控作用。结果表明,IRX3基因在牛13个不同组织中均有表达,且在肺、肾、心、皮下脂肪、背最长肌中高表达(P<0.05)。利用双荧光素酶报告载体检测到牛IRX3基因核心区域在-372/-42 bp。结合定点突变及siRNA干扰技术初步鉴定NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1转录因子对IRX3基因的转录活性有重要的调控作用。综上表明,牛IRX3基因在背最长肌和脂肪组织中表达量相对较高,其启动子1.8 kb区有8个CpG岛,核心区关键转录因子NRF1、KLF...

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图5牛IRX3基因核心启动子区转录因子结合位点预测

图4IRX3基因核心启动子鉴定图6定点突变关键转录因子酶活测定

图6定点突变关键转录因子酶活测定

图5牛IRX3基因核心启动子区转录因子结合位点预测图7siRNA干扰关键转录因子酶活测定

图7siRNA干扰关键转录因子酶活测定

图6定点突变关键转录因子酶活测定3讨论

图1IRX3基因在牛不同组织中表达量分析

表1引物信息Table1Primersusedinthisstudy项目Item引物名称Primername引物序列(5′→3′)Primersequence退火温度/℃Tm扩增片段长度/bpProductlength扩增区域/bpAmplifie....

本文编号：3976862