抗EpCAM+CD3双特异性抗体关键表征解析

发布时间：2023-04-05 02:52

　　目的:解析抗Ep CAM+CD3双特异性抗体(Bs Ab)的关键表征。方法:以抗Ep CAM+CD3双特异性抗体为研究对象,超高效液相色谱串联质谱联用技术(LC-MS/MS)检测相对分子质量、肽图(氨基酸序列)、N-糖基化位点、糖型及各糖型含量、二硫键位点;表面等离子体共振(SPR)技术测定其与上皮细胞粘附因子(Ep CAM)、白细胞分化簇3(CD3)和Fc受体(Fc Rs)的亲和力。结果:含糖基化的完整抗体、轻链、重链和单链的相对分子质量分别为128 521.78、24 117.83、50 808.85和53 585.87;不含糖完整抗体、轻链、重链和单链的相对分子质量分别为125 633.30、24 117.85、49 364.53和52 141.30;对象Bs Ab氨基酸序列与理论序列一致;N-糖基化位点位于重链Asn₃₀₀和单链Asn₃₂₆;N-连接寡糖的糖型包括以岩藻糖化的双天线复杂N-糖(G0F占全部糖型含量77.10%)为主的11种糖型;对象Bs Ab内含13对二硫键;单链第Cys₁₀₅位和第Cys

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【文章目录】：
1 仪器、样品与试剂
    1.1 仪器和设备
    1.2 研究用样品
    1.3 主要试剂
2 方法与结果
    2.1 完整抗体相对分子质量分析
    2.2 抗体亚基相对分子质量分析
    2.3 肽图分析
    2.4 二硫键分析
    2.5 糖型分析及N-糖基化修饰位点分析
        2.5.1 糖型
        2.5.2 N-糖基化修饰位点
    2.6 亲和力分析
        2.6.1 样品与Ep CAM亲和力检测
        2.6.2 样品与CD3亲和力检测
        2.6.3 样品与FcR亲和力检测
        2.6.4 样品与FcRn亲和力检测
        2.6.5 曲妥珠单抗与FcRs亲和力检测
        2.6.6 检测结果
3 讨论



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