Talin通过胞内张力调控神经突起生长的机制

发布时间：2023-04-28 01:45

　　目的:神经突起的生长和延伸受到细胞内化学和力学信号的共同调节。Talin蛋白由于它的特殊结构域能调节细胞内化学信号和力学活动,在神经元极化和生长过程中起关键调节作用。Talin由头部(head)和杆部(rod)两个功能结构域组成,但是各功能域是如何通过调节化学信号及力学活动来影响神经突起生长的机理还未明确。同时,传统中医药也能有效的促进神经的修复和再生,它们是否通过Talin的化学信号和力学活动参与神经生长也有待探索。本研究采用基于荧光共振能量转移原理(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的张力探针技术,揭示了 Talin化学信号和力学活动在神经极化和生长中的调控机制及其相关中药的药理学机制。方法:采用NGF和胶质瘢痕抑制剂aggrecan刺激PC12和SH-SY5Y细胞分别构建神经突起生长和抑制模型;脂质体转染克隆质粒在细胞内实现Talin,Talin head,Talin rod各亚分子结构域的表达;免疫印迹鉴定Talin,Integrin,FAK及p-FAK的蛋白水平。免疫荧光观察Integrin活性变化、Talin和DOK1的...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 实验材料与试剂
        1.1 细胞系
        1.2 实验动物
        1.3 仪器设备
        1.4 干扰RNA与质粒
        1.5 实验抗体试剂
    2. 研究方法
        2.1 细胞培养
        2.2 总RNA的提取及鉴定
        2.3 Real-time RT-PCR
        2.4 蛋白质的抽提及浓度测定
        2.5 免疫印迹
        2.6 免疫荧光
        2.7 活细胞染色
        2.8 原代大脑皮层神经元的提取
        2.9 渗透压的测定
        2.10 质粒的设计和转染
        2.11 小干扰的转染
        2.12 张力探针结构及其有效性与可行性的验证
    3. 数据处理
结果
    第一部分. Talin通过整合素化学信号及其相关张力活动共同调控神经突起的生长
        1. Talin的完整结构是促进神经突起延伸所必需的
        2. 在神经生长过程中NGF和Aggrecan调控Talin rod内的张力
        3. SH-SY5Y细胞中增加的Talin张力来源于向内的微丝力
        4. Talin张力受整合素构象变化调控
        5. Talin和Integrin信号能够调节细胞内渗透压
    第二部分. DOKI下调整合素信号和Talin张力抑制神经突起的生长
        1. Aggrecan能上调在NGF刺激下的PC12和SH-SY5Y细胞中DOK1和SHARPIN的蛋白表达量
        2. DOK1能通过下调整合素的活性抑制神经突起的延伸
        3. DOK1能通过削弱Talin的张力和细胞内渗透压抑制神经突起的延伸
        4. DOK1能抑制大脑皮层神经元轴突的生长
    第三部分. 人参皂苷RD通过增强Talin张力促进神经突起的延伸
        1. 人参皂苷RD能促进神经突起的生长与延伸
        2. 人参皂苷RD能上调Talin的张力
讨论
小结
参考文献
附录
    附录(一) 综述
        参考文献
    附录(二) 缩略词表
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3803487