DNCB诱导TRPA1基因敲除小鼠特应性皮炎模型的建立与评价

发布时间：2024-02-22 20:36

　　目的:在C57BL/6遗传背景下的野生型以及瞬时受体电位通道A1(transient receptor potential cation channel,subfamily A,member 1,TRPA1)基因敲除小鼠上建立2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型,初步探索TRPA1在该模型的作用。方法:首先将野生雄性C57BL/6小鼠随机分成实验组(n=6),对照组(n=6),建立AD模型。具体造模方案:在致敏阶段,于第1天小鼠背部及耳部分别使用2%DNCB(丙酮/橄榄油3∶1)溶液及单纯丙酮/橄榄油溶液外涂。在激发阶段,于第5、8、11、14、17、20天背部及耳部分别外涂0.5%DNCB溶液及单纯丙酮/橄榄油溶液,共6次,造模后取皮损行HE染色,鉴定AD模型。通过qRT-PCR和Western blot检测背部皮损TRPA1 mRNA和蛋白的表达水平,免疫组化检测TRPA1蛋白的定位及表达水平。然后随机选取6只TRPA1+/+(野生型)小鼠为模型组I,6只TRPA1-/-(敲...

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【部分图文】：

图4不同组别小鼠皮炎症状评分和耳部厚度动态变化

经反复接触致敏后，对照组小鼠皮肤表现正常，模型Ⅰ、Ⅱ组小鼠皮肤可见不同程度的水肿、红斑、脱屑、结痂等炎症反应。皮损动态评分显示，模型Ⅱ组低于模型Ⅰ组，且有统计学差异(图4A)。小鼠耳部经反复接触致敏后，对照组小鼠耳部肿胀程度没有明显变化，模型Ⅰ、Ⅱ组小鼠耳部肿胀程度逐渐加重，模型....

图5不同组别小鼠背部、耳部皮损组织HE变化（40×）

对照组正常，未见炎症反应，模型Ⅰ、Ⅱ组小鼠背部或耳部皮肤可见角化过度和(或)角化不全、棘细胞层增厚、棘细胞部分细胞间水肿、细胞内水肿、真皮淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，且与模型Ⅰ相比较，模型Ⅱ组棘细胞层的肥厚程度及炎性细胞的浸润程度明显轻于模型Ⅰ组，如图5所示。2.2.3肥大细胞....

图6不同组别小鼠对照组与模型组背部皮损肥大细胞染色

经台盼蓝染色后，通过计数平均肥大细胞数目发现，与对照组(3.83±0.75)/视野，模型组Ⅰ组(20.50±1.64)/视野和模型Ⅱ组(11.00±1.55)/视野明显增加真皮肥大细胞数目，差异有统计学意义(t=22.59,P=0.000;t=6.95,P=0.000)(图6A)....

图7qRT-PCR检测不同组别皮肤组织白介素-4、白介素-13、γ干扰素的相对表达

qRT-PCR检测皮肤组织相应炎症因子结果显示，与对照组相比较，模型Ⅰ、Ⅱ组TH2细胞因子(白介素-4、白介素-13)相对表达水平升高，差异均有统计学意义。而TH1细胞因子(γ干扰素)相对表达水平差异无统计学意义。与模型Ⅰ组相比较，模型Ⅱ组TH2细胞因子(白介素-4、白介素-1....

本文编号：3907229