仿颅颌面骨再生相关基因调控的实验研究

发布时间：2024-06-15 01:33

　　因肿瘤、外伤、放射性骨坏死、骨髓炎、牙周炎或先天疾病等导致的颅颌面骨缺损直接影响口腔颌面部修复，颌骨缺损修复时新骨形成的质量、速度和长期稳定性与种植义齿修复息息相关。多年来，临床医师和研究者们尝试利用自体或异体骨移植、人工骨移植、细胞或／和生长因子介导的组织工程技术、屏障膜及骨牵张等临床技术，在修复颌骨或牙槽骨缺损方面取得了一定的成效。近年来，骨缺损修复的理念更倾向于——结合细胞及活性分子的骨支架材料植入机体后能引导及促进机体自身组织的再生修复，因此，设计模仿骨再生生理机制的骨缺损修复方案至关重要。根据颅颌面膜内成骨的特点，我们选择了在骨缺损修复初期能促进血管再生的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，和在骨缺损修复中后期能调控其下游信号通路促进新骨再生的信号分子SonicHedgehog(Shh)，目的是通过对这两种关键因子的调控，模拟机体骨缺损修复过程，探寻理想的促颌骨缺损修复方案。方法是利用腺相关病毒高效稳定的感染效率及四环素调控系统对外源基因的开关作用，构建重组病毒rAAV2-Shh及rAAV2-tet-off-bFGF；将两种病毒共同感染原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞；继而将这...

【文章页数】：168 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1.1重组质拉示意图

2.2稳定细胞株的建立按GIBCO旧RL产品说明书提供的方法，用Lipofeetamine2000将pSNAV2.0一Shh质粒转染六孔板中的BHK一21细胞，24h后用800m留LG418选择培养。待抗性克隆生长至孔底面积的二分之一左右时，用胰酶消化，继续用G418选择培养直至....

图1.1‘ZpBlueseriptSKll一Shh经&oRI和介nl双酶t)J鉴定Ml:DNAMarker2000

3.2重组质粒pSNAV2.0一Shh的鉴定PCR产物电泳结果显示能从质粒pBltlescriPtsKI卜Sllh_}几扩增出l.4kb的特异条带(图1.1.3);将此特异条带垂组至lJ质粒PSN八VZ.o上几，构建币组质粒psNAVZ.O一Shh;随泪L挑取转化菌落的阳性克隆....

图11.5斤oRI和L\.azl双酶切鉴定重组质粒pSNAVZ.o一shrlMl:DN八Marker2000

斤oRI和L\.azl双酶切鉴定重组质粒pSNAVZMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落样品1中提取的psN八v2.()一shrl2:l宜落样品2「扫提取的psN八v2.()一sh一13:菌落样品3，护提取的psN八VZ.o一shh测层....

图I.16r八AvZ一shll的505一P八GE纯度分析

250020001000.5斤oRI和L\.azl双酶切鉴定重组质粒pSNAMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落样品1中提取的psN八v2.()一2:l宜落样品2「扫提取的psN八v2.()一3:菌落样品3，护提取的psN八VZ.o一测....

本文编号：3994720