La/SSB嵌合体自体抗体受体修饰的NK92MI细胞靶向性治疗自身免疫性疾病

发布时间：2024-03-09 05:16

　　理想上来说,自身免疫性疾病的治疗应该消除致病性的自身免疫细胞而不影响机体正常的保护性免疫功能。但是,可行性的策略一直很难被发现。这里,我们提出在自身抗体介导的自身免疫性疾病中,BCR识别自身抗原,其可变区发生重排产生只针对自身抗原的特异性序列,此序列只在致病性B细胞上表达,而在其它正常的B细胞表面不表达。因此,根据此B细胞受体(BCR)的特异性,构建自身抗原为基础的嵌合体免疫受体的NK92MI细胞,杀伤过度反应的表达特异性BCR的B细胞。我们重新编辑了NK92MI细胞,使其表达一个嵌合体自体抗体受体修饰的结构(CAAR),此结构包括自身免疫性疾病自身抗原La/SSB及CD28-CD137-CD3ζ信号结构域。我们发现La/SSB嵌合体自体抗体修饰的NK92MI(La/SSB-CAAR NK92MI)细胞能够特异性有效的杀伤特异性表达抗La/SSB B细胞受体(La/SSB-BCR)的B细胞来源的细胞(LaA-BCR Romas,LaA-BCRMaver-1)及T细胞来源的细胞(LaA-BCR-Jurkat)。此外,La/SSB嵌合体自体抗体受体修饰的NK92MI细胞(La/SSB-CA...

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图1A：cDNA中PCR获得LaA片段，经过SDS-PAGE琼脂糖电泳，在凝胶成像仪下观察条带大小，由图可示，在250-500bp可见目的条带，大小正确

46NA中PCR获得LaA片段，经过SDS-PAGE琼脂糖电泳，在带大小，由图可示，在250-500bp可见目的条带，大小正确体双酶切后，条带大小正确。C：LaA片段连接的pET28a（

图2：菌液PCR鉴定结果

SB嵌合体自体抗体受体修饰的NK92MI细胞靶向性治疗自身免疫性疾病三、结果达载体示意图。D：pET28a（+）载体示意图的具体序列，本实验选取的酶切为NheI和XhoI，由图可示，我们保留了一个His标签，便于进一步LaA原达蛋白的诱导及纯化。将带有Nh....

图3：A：LaA-pET28a（+）原核表达载体转化入BL-21菌株后，经过IPTG诱导4.5h后，SDS-PAGE跑胶，考马斯亮蓝染色观察LaA蛋白条带的大小，LaA蛋白分子量大约为16KD，16KD左右没有目的条带

LaA-pET28a（+）原核表达载体转化入BL-21菌株后，DS-PAGE跑胶，考马斯亮蓝染色观察LaA蛋白条带的为16KD，16KD左右没有目的条带。Lane1：对照组对照组BL-21菌液上清液；Lane3：LaA-LaA-pET28ae4：LaA-LaA-....

图4：LaA与Non-LaA蛋白经过镍柱亲和纯化后，经过SDS-PAGE跑胶，考马斯亮蓝染色后，观察纯化效果及目的条带的大小

获取上清进行镍柱亲和纯化，获得高纯度的LaA与Non-LaA蛋白，见图4。图4：LaA与Non-LaA蛋白经过镍柱亲和纯化后，经过SDS-PAGE跑胶，考马斯亮蓝染色后，观察纯化效果及目的条带的大小。Lane1为纯化前的LaA蛋白；Lane2为纯化前的....

本文编号：3922954