甲壳质对小鼠特应性皮炎作用的实验研究

发布时间：2017-04-30 09:15

  本文关键词：甲壳质对小鼠特应性皮炎作用的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的利用小鼠特应性皮炎(AD)模型,探讨甲壳质对AD的作用及作用机制,为将来甲壳质应用于临床治疗特应性疾病提供科学依据。方法将28只BALB/c小鼠随机分成3组:对照组(N组)(8只)、模型组(M组)(10只)、甲壳质组(E组)(10只)。先对小鼠进行腹腔注射OVA2次致敏小鼠,2次间隔5天,半月后再在其背部皮肤外敷OVA,诱发特应性皮炎(模型组),每次外敷OVA一周,共外敷两次,中间间隔两周。在建模过程中甲壳质组同时给予3mg/d甲壳质灌胃,为期4周,模型组与对照组每天给予等量的生理盐水灌胃。建模成功后处死各组小鼠,取背部皮肤,部分进行石蜡切片,HE和甲苯胺蓝染色,显微镜下观察组织学变化。部分皮肤提取总RNA,利用RT-PCR法检测皮肤中细胞因子的m RNA表达。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总Ig E、总Ig G2a和OVA-specific Ig E的水平;取脾细胞及引流淋巴结细胞进行体外培养,ELISA法测定培养液中细胞因子的含量。结果HE染色结果显示,与模型组小鼠比较,甲壳质组小鼠皮肤激发处炎症症状较轻,皮肤表皮层与真皮层增厚程度降低,真皮内炎症细胞浸润总量(P0.05)、嗜酸性粒细胞数量及肥大细胞数量(P0.01)明显减少。ELISA实验结果表明,甲壳质组小鼠血清中总Ig E和OVA-specific Ig E的水平明显降低(P0.05~0.001),Ig G2a水平显著升高(P0.001)。甲壳质组小鼠脾细胞及淋巴结细胞体外培养产生的IL-12及IFN-γ水平明显高于模型组,而IL-4水平明显低于模型组(P0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,在甲壳质小鼠特应性皮炎炎症处皮肤中,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-12的m RNA表达量增高。结论甲壳质能有效减轻OVA诱导的小鼠AD症状,改善局部组织学炎症反应,降低小鼠血清中Ig E水平。甲壳质通过调节机体Th1/Th2免疫平衡,发挥抗AD过敏反应的作用,为甲壳质用于治疗特应性皮炎提供实验依据。
【关键词】：甲壳质 卵清蛋白 特应性皮炎
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R758.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 前言6-8
• 流程图8-10
• 第一章 材料与方法10-17
• 1.1 材料10-11
• 1.1.1 主要仪器设备10
• 1.1.2 实验动物10
• 1.1.3 试剂10-11
• 1.2 方法11-17
• 1.2.1 动物模型的建立11-12
• 1.2.2 甲壳质颗粒的制备12
• 1.2.3 皮肤组织的标本制备及病理学观察12
• 1.2.3.1 皮肤组织的标本制备12
• 1.2.3.2 HE和甲苯胺蓝染色12
• 1.2.4 小鼠的脾脏、淋巴结分离与其细胞培养12-13
• 1.2.4.1 脾脏的分离12-13
• 1.2.4.2 收集脾细胞13
• 1.2.4.3 脾细胞的培养13
• 1.2.4.4 淋巴细胞分离与细胞培养13
• 1.2.5 酶联免疫吸附实验 （ELISA）13-14
• 1.2.6 实时荧光定量PCR14-16
• 1.2.6.1 抽提总RNA14
• 1.2.6.2 反转录反应14-15
• 1.2.6.3 PCR扩增反应15-16
• 1.2.7 统计学方法16-17
• 第二章 结果17-28
• 2.1 小鼠背部皮肤的肉眼观察17-18
• 2.2 小鼠背部皮肤的组织学改变18-22
• 2.3 小鼠血清中免疫球蛋白的改变22-23
• 2.4 小鼠背部皮肤细胞因子的mRNA表达23-24
• 2.5 细胞培养上清液中细胞因子的表达24-28
• 2.5.1 卵清蛋白刺激脾细胞与淋巴结细胞24-27
• 2.5.2 甲壳质对正常脾细胞的体外刺激作用27-28
• 第三章 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-33
• 综述33-44
• 综述的参考文献39-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 附录45-46
• 致谢46-47

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