RPL8蛋白冲击的DC疫苗抑制黑色素瘤生长的研究

发布时间：2017-06-16 00:03

  本文关键词：RPL8蛋白冲击的DC疫苗抑制黑色素瘤生长的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：构建RPL8原核表达载体,经诱导表达后获得一定纯度的RPL8蛋白；冲击致敏DC,观察其在体外对CTL的增殖和活化效果；免疫治疗荷瘤小鼠后,观察小鼠的存活期及肿瘤体积变化。 方法： 1.PCR扩增目的基因pUC57-RPL8,双酶切后与载体pET28a (+)连接、构建pET28a (+)-RPL8重组质粒,经双酶切及测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blotting鉴定。 2.无菌分离小鼠骨髓细胞,在细胞因子rm-CSF、rmIL-4、LPS联合诱导下,体外培养DC,每天在显微镜下观察DC形态特征,LPS诱导前后用流式细胞仪检测其DC的表面标志。 3.RPL8蛋白与DC混合培养,24h后加入FITC-羊抗鼠抗体,1h后在荧光倒置显微镜下观察。 4.RPL8冲击树突状细胞后与尼龙毛柱分离的小鼠脾脏T淋巴细胞,按不同比例混匀,72h后分别以不同效靶比加入到Bl6黑色素瘤细胞中继续培养48h后,酶标仪测其OD值。 5.将RPL8蛋白冲击的DC疫苗注入荷瘤小鼠体内,观察肿瘤的体积变化及小鼠的生存时间与瘤体组织的病理变化。 结果： 1.构建的pET28a (+)-RPL8重组质粒酶切鉴定及测序结果正确；经SDS-PAGE电泳和Western Blotting分析可见约28KDa大小蛋白。 2.倒置显微镜下观察DC具有典型的树突状结构,流式细胞仪检测CDllc、CD80、MHC-I类及MHC-II类分别为77.3%、76.1%、62.2%和74.4%；荧光倒置显微镜下观察DC内有绿色荧光。 3.RPL8蛋白冲击DC组可刺激T细胞增殖和活化能力,其诱导的CTL对小鼠黑色素瘤细胞有特异性杀伤作用。 4.RPL8蛋白冲击的DC疫苗,注入荷瘤小鼠体内后,小鼠生存期明显延长,能抑制肿瘤生长,肿瘤体积大小明显小于DC及PBS组。 结论：成功制备DC疫苗,该疫苗对黑色素瘤有生长抑制作用,为免疫治疗黑色素瘤提供理论依据。
【关键词】：原核表达 RPL8 树突状细胞 黑色素瘤 免疫治疗
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 英文缩略词对照表3-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一部分：RPL8原核表达载体的构建及诱导表达12-23
• 材料12-15
• 方法15-19
• 结果19-22
• 讨论22-23
• 第二部分：RPL8蛋白冲击DC疫苗的制备23-31
• 材料23-24
• 方法24-26
• 结果26-29
• 讨论29-31
• 第三部分：RPL8蛋白冲击的DC疫苗对小鼠体内黑色素瘤的抑制作用31-39
• 材料31-32
• 方法32-34
• 结果34-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述：DC疫苗在黑色素瘤免疫治疗中的应用43-49
• 参考文献47-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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  本文关键词：RPL8蛋白冲击的DC疫苗抑制黑色素瘤生长的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：453821