银屑病患者皮损间充质干细胞分离、培养、鉴定及对T细胞增殖影响的研究

发布时间：2017-07-20 13:11

  本文关键词：银屑病患者皮损间充质干细胞分离、培养、鉴定及对T细胞增殖影响的研究

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【摘要】：目的：银屑病患者皮损间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在体外进行分离、培养及鉴定,明确皮肤MSCs的培养体系,并研究银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的影响、银屑病患者皮损MSCs细胞因子水平及与病变程度的相关性。 方法：①分离、培养15例银屑病患者皮损与15例健康人皮肤的单个核细胞,②流式细胞术检测细胞表面标记物CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR③经相应诱导剂诱导细胞,并鉴定多向分化的细胞④采用MTT法,观察MSCs对外周血T细胞增殖的影响⑤ELISA法检测第3代皮肤单个核细胞培养上清液细胞因子水平⑥根据银屑病皮损面积和严重程度的PAS I评分法,经Pearson相关分析、评估细胞因子水平与银屑病病变程度的相关性。 结果：①分离、培养MSCs:a.分割皮肤组织成小组织块,置于2.5g/L DispaseII酶、37℃三小时,分离真皮和表皮、弃表皮,将真皮切碎、吹打、过滤、离心、收集细胞,培养至5%C02、37℃培养箱中；b.待细胞贴壁达90%以上,传至第3代；c.倒置显微镜下观察两组MSCs细胞形态相似；②流式细胞仪检测MSCs表面标记物CD29、CD44、CD73、CD90及CD105均呈高表达,而CD34、CD45及HLA-DR呈低表达,证明培养MSCs有较高的纯度；③诱导MSCs可向脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞分化④T细胞增殖活性检测结果：银屑病患者皮损及正常皮肤来源的MSCs对外周血T细胞增殖均有抑制作用(P0.05),而患者皮损MSCs的抑制能力减弱(P0.05)；⑤与健康人比较,银屑病患者皮损MSCs上清液中IL-11显著增高,而IL-6、HGF降低(P0.05)；⑥银屑病患者皮损MSCs细胞因子水平与PAS I评分无相关性。 结论：①成功分离、培养、鉴定皮肤MSCs,建立了皮肤MSCs的培养体系,为培养皮肤MSCs提供正确、有效的方法；②银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的抑制能力减弱；③银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的抑制能力减弱可能是通过细胞因子分泌水平异常引起的,而细胞因子水平与PASI评分无相关性,揭示银屑病患者皮损MSCs异常可能参与银屑病的发病。
【关键词】：银屑病 间充质干细胞 T淋巴细胞 细胞因子
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料与方法12-20
• 1.1 标本来源12
• 1.2 主要试剂12-13
• 1.3 主要仪器设备13-14
• 1.4 实验方法14-19
• 1.5 统计处理19-20
• 第二章 实验结果20-23
• 2.1 MSCs培养形态学的观察和细胞的鉴定20-21
• 2.2 T细胞增殖活性检测结果(见表1)21
• 2.3 ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子结果(见表2)21
• 2.4 PEARSON相关分析患者细胞因子水平与病变严重程度21-23
• 第三章 讨论23-26
• 第四章 结论26-27
• 参考文献27-30
• 附图30-33
• 综述33-44
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 康德智;林建华;余良宏;雷盛民;吴朝阳;;大鼠骨髓间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤的修复作用[J];中华神经医学杂志;2006年11期

2 孔国英，刘忠浩，帅建中，罗学港;DiI在已固定脑组织中的示踪研究[J];湖南医科大学学报;1994年01期

3 张卫泽;樊艳;陈永清;马凌;秦勉;哈小琴;李国庆;;成人脂肪间充质干细胞冻存的实验研究[J];兰州大学学报(医学版);2008年02期

4 汪浩文;何志旭;王志华;刘俊峰;;大鼠骨髓间充质干细胞多向分化潜能的研究[J];复旦学报(医学版);2009年05期

5 史春梦,程天民;大鼠真皮间充质干细胞的体外长期培养及胶原海绵对其生长的影响[J];生物医学工程学杂志;2002年04期

6 舒胜文,李盛琳,马绪臣,傅嘉,章魁华;大白鼠骨髓间质干细胞体外培养体系的建立及分化研究[J];现代口腔医学杂志;2002年02期

7 廖联明,韩钦,赵春华;间充质干细胞在免疫治疗中的应用[J];中国实验血液学杂志;2005年01期

8 丁晓岚;王婷琳;沈佚葳;王晓艳;周城;田珊;刘盈;彭光辉;周俊娥;薛树旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴广德;白云花;刘青;李航;张建中;;中国六省市银屑病流行病学调查[J];中国皮肤性病学杂志;2010年07期

9 潘智慧;王丽;刘瑞风;张永翠;李欣;王荣;刘小民;张开明;;皮肤间充质干细胞的原代培养[J];中国皮肤性病学杂志;2012年02期

10 郑敏,浙江大学医学院第二医院皮肤科;银屑病是细胞免疫介导性疾病?[J];中华皮肤科杂志;2002年02期

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本文编号：568159