甲羟戊酸代谢途径紊乱对原代角质形成细胞增殖、分化及凋亡的影响

发布时间：2017-09-08 09:32

  本文关键词：甲羟戊酸代谢途径紊乱对原代角质形成细胞增殖、分化及凋亡的影响

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【摘要】：目的探讨甲羟戊酸代谢途径紊乱对原代角质形成细胞(KCs)增殖、分化及凋亡的影响,以及参与调控的可能的分子机制,为更清楚的了解播散型浅表性光化性汗孔角化症(DSAP)的病理及分子机制提供依据。方法(1)培养人原代皮肤角质形成细胞(KCs),利用催化甲羟戊酸途径顺利进行的关键酶的特异性抑制剂(羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂(Pravastatin(PRA),法尼基合成酶抑制剂(Alendonate(ALD),法尼基转移酶抑制剂(FTI-277)和香叶基转移酶抑制(GGTI-298)单独或联合甲羟戊酸途径代谢产物(甲羟戊酸(MVA),法尼焦磷酸(FPP),香叶基香叶焦磷酸(GGPP),胆固醇(CH))来处理角质形成细胞2d后,MTS及流式细胞术分析其对细胞活力及细胞周期的影响。提取细胞总蛋白,Western-blot检测细胞周期相关蛋白cyclinB1, cyclinE,p21的表达量,同时分析对丝裂原激活的蛋白激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)信号通路以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B信号通路的影响。(2)按照上述方式处理KC细胞2 d,加入Ca2+(1.2mM)刺激细胞1d后,提取细胞总蛋白,采用Western-blot法检测其对Ca2+诱导的原代角质形成细胞(KC)化maker (Involucrin, Keratin 1)的表达影响并分析对p53,Notch1及丝裂原激活的蛋白激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)信号通路以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B信号通路的影响。(3)同样按照上述方式处理KC细胞,流式细胞术分析对细胞凋亡的影响。结果(1)增殖结果：MTS结果显示,PRA和ALD强烈抑制KC细胞增殖,FTI和GGTI也抑制细胞增殖,但程度相对较弱。只有CH能够部分补救PRA和ALD对细胞造成的增殖抑制效应。此外,MVA,FPP，，GGPP产生部分增殖抑制效应。流式-周期结果显示,PRA和ALD将KC细胞阻滞在G1期,同时CH能够补救PRA及ALD产生的G1期阻滞效应。FPP,GGPP本身也有一定的G1阻滞作用。此外,FTI,GGTI对细胞周期无明显影响。Western-blot结果表明,PRA,ALD,FTI,GGTI单独或联合作用均很大程度地下调cyclinB1而上调cyclinE,p21的表达。同时也能促进PI3K-AKT信号通路,抑制MAPKs-ERK1/2信号通路的激活状态。(2)分化结果：Western-blot结果表明PRA,ALD,FTI,GGTI单独或联合使用均抑制Ca2+诱导的Involucrin的表达；所有的抑制剂单独或联合处理KC细胞均能下调p53,Notchl的表达；信号通路研究表明,Ca2+激活AKT,抑制ERK1/2的活化状态,ALD单独及四种抑制剂联合处理KC细胞能上调AKT的磷酸化水平,而PRA,FTI,GGTI均下调AKT,上调ERK1/2的磷酸化水平。(3)流式-凋亡结果显示,甲羟戊酸代谢途径紊乱对KC细胞凋亡不产生明显的影响。结论甲羟戊酸代谢途径紊乱能够抑制原代角质形成细胞(KCs)的增殖、分化,但不影响凋亡。
【关键词】：甲羟戊酸途径 KC细胞 DSAP 增殖 分化 凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.5
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 引言12-16
• 2 材料与方法16-27
• 3 结果27-50
• 4 讨论50-53
• 5 结论53
• 6 参考文献53-59
• 附录59-60
• 个人简历59-60
• 致谢60-61
• 综述61-69
• 1.甲羟戊酸途径关键酶及其作用62-63
• 2.甲羟戊酸途径与心血管疾病的关系63
• 3.甲羟戊酸途径与神经疾病的关系63-64
• 4.甲羟戊酸途径与肿瘤的关系64-65
• 5.甲羟戊酸途径展望65
• 6.参考文献65-69

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本文编号：813251